测定双黄连口服液有效期-武汉东湖学院论文集

双黄连口服液有效期的测定

武汉东湖学院生命科学与化学学院　郑　晶　阎　隽　高慕容　刘黎亚　安从俊

双黄连含有金银花、黄芩、连翘三味中药成分，具有清热解毒、辛凉解表的功效，临床常用剂型有散剂、口服液、粉针剂、颗粒剂、软胶囊剂等，具有广谱抗微生物作用，在临床各科应用广泛。黄芩为双黄连口服液的主要质量控制指标之一。有效期是衡量药物稳定性的重要参数之一，为考察双黄连口服液的稳定性，本文根据初均速动力学方法，对双黄连口服液进行恒温加速实验，实验药液经0.8um微孔滤膜滤过，0.2 mol/L盐酸溶液沉淀分离，再采用紫外可见分光光度法，在276 nm波长处测定黄芩苷的含量变化，结合相应的曲线推算出其有效期为2.23年。此数据为该制剂贮存和使用提供实验参考依据。

一、引言

一般药物制剂的稳定性实验方法可分为两类，即室温留样观察法和加速实验法。室温留样观察就是不使用任何的反应条件，看其自动分解10%所需的时间，也就是其有效期；加速实验法就是加强外界条件，改变反应速度，运用动力学方法来计算出有效期。

本文采用的就是初匀速法，类似加速实验法。初匀速法,将具有含量均一性的样品，分置不同的温度段恒温加热，定时取样，迅速降温而中止反应。测定零时刻初始含量C0及加热后含量Ct，然后根据动力学曲线进行数据处理。

初匀速法认为，当样品分解较少时，可视反应初始速度为一定值，即记V_o=(C_o-C_t)/t，将摄氏温度t(℃)转换为绝对温度T(T=t+273.2K)，以lgV_oi对1/T进行曲线拟合可得一直线。将室温(T=298K)值代入回归方程，外推求算室温(T=298K)贮存期，即得该药物的有效期。初匀速法是热稳定性实验中常用的方法之一，具有取样点少、在每个温度段只需测定一次含量、分析工作量轻的优点。

二、仪器和主要试剂

紫外可见分光光度计（SP-1901 UV-VIS）；高速离心机（北京医用离心机厂）；分析天平（TG328A型，上海仪器制造厂）。

黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)；双黄连口服液(郑州制药有限公司，自备)。甲醇、乙醇（天津市四友精细化学品有限公司）均为分析纯。

三、实验部分

1.对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品10mg，用95%乙醇溶解后定容于100mL容量瓶中，配制成0.1mg/mL的对照品储备液。精密吸取0.50mL该储备液于10mL容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，配制成5ug/mL的对照品溶液。

2.测定波长的选择

取自备的双黄连口服液2mL，置于100mL容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。分别精密量取自备的黄芩苷供试品溶液和上述制备的黄芩苷对照品溶液各1.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加入0.2 mol/L盐酸定容至刻度,摇匀。在200～420nm波长范围内测定其吸光度。另取双黄连口服液2mL，按处方比例制备的缺黄芩阴性对照液2mL，在200～420nm波长范围内测定其吸光度。

结果表明，黄芩苷对照品溶液，双黄连口服液样品液在276nm波长处有最大吸收，阴性对照液在该波长处无干扰。

图1　0.5ug/mL黄芩苷紫外吸收光谱

3. 回归方程的建立

精密量取上述黄芩苷对照品溶液0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于25mL容量瓶中，加O.2mol/L盐酸定容至刻度，摇匀。在276nm波长处分别测定其吸收度。

图2　黄芩苷标准曲线

以吸收度A对浓度C进行线性回归得回归方程C=2.498A+0.0052，R＝0.9999，线性关系良好。

4.样品黄芩苷含量的测定

精密量取上述双黄连口服液2mL置于离心管中，滴加5滴6mol/L盐酸溶液，摇匀，即析出沉淀。离心，弃取上清液，沉淀用0.2mol/L盐酸5滴洗涤一次；加70%乙醇约5mL，微热溶解，转移至50mL容量瓶中，以70%乙醇洗涤沉淀数次并入量瓶，加至刻度摇匀即得样品液。精密量取样品液1mL，置于25mL容量瓶中，加0.2mol/L盐酸至刻度，摇匀。在276nm波长处测定吸收度，根据回归方程计算黄芩苷的含量。

测得本批样品黄芩苷的含量为：7.3912(mg/m1)。

5.回收率试验

精密量取已知黄芩苷含量的同一批双黄连口服液5份各0.5mL，分别定量加入含量为3.1mg/mL的黄芩苷对照品溶液1.0mL，分别置于25mI容量瓶中加0.2mol/L盐酸至刻度，计算黄芩苷含量，结果见表2。

表1　同批样品回收率试验

6.稳定性加速实验

量取同一批双黄连口服液2mL，分别置于55℃、65℃、75℃、85℃、95℃、100℃恒温水浴中加热，定时取出，迅速冷却。取经不同温度处理的样品经0.8um，微孔滤膜滤过，照上述方法测定黄芩苷含量。以原含量为100%，折算为剩余百分含量。(www.xing528.com)

四、数据处理及结果分析

1.计算公式

根据公式V_oi=(100-C_i)/t_i，可以计算得出不同温度时样品中黄芩苷分解的初均速。式中,V_oi为分解反应的初均速度；C_i为经不同温度不同处理时间样品中黄芩苷剩余百分含量；t_i为恒温加速时间。结果见下表。

表2　不同温度时样品中黄芩苷分解的速度

2.数据处理

以logv_oi对1/T作线形回归，求得直线回归方程为logv_oi=-6.7647×1/T+14.9256，R=0.9928，线性相关较好。

图3　log v_oi 与1/T关系曲线

由于药物一般存放在室温下，将室温T=298K代入下述方程，从方程中可计算得双黄连口服液的有效期：

logv_oi=log(100-90)/t_0.9=-6.7647/298+14.9256, t_0.9=19534.8h =813.95d»2.23年。

3.结果分析

根据试液中黄芩苷损失10%所需时间计算得出双黄连口服液的有效期为2.23年。此结论为双黄连口服液的存放有效期提供了较为可靠的动力学依据。

五、讨论

据报道，以盐酸溶液沉淀分离后采用紫外可见分光光度法，在276 nm波长处测定双黄连口服液中黄芩苷的含量，其测定结果与高效液相色谱法(HPLC)法相吻合。在本文的研究中，对经加温处理的样品以0.8um微孔滤膜滤过后再采用上述方法测定，可更好地免除组分间的干扰。

由于温度对药物分解反应初均速度有影响且符合Arrheniues指数规律，我们按Arrheniues指数规律外推至室温（T=298K），计算得到贮存有效期。中药制剂中有效成分的分解多为复杂反应，不同温度下的反应级数可能不同，用经典恒温加速实验需在每个温度下多次取样直至反应后期，致使线性关系不佳。用初均速法来计算的药物稳定性及其有效期，其最大的优点是在若干个温度下测定药物分解的初均速度，可排除反应后期副反应及产物的干扰，为药物有效期的计算提供较为可靠的动力学实验数据。

另外，本文的实验结果分析表明，应用初均速法结合紫外分光光度法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量变化，进而预测其稳定性是可行的。此法加热时间短、取样量少、操作简便，结果线形关系良好，所得数据可作为考察和制定该制剂有效期的参考依据。

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