实罐灭菌-生物制药实训

一、任务目标

1.初步学会5BGZA型号机械搅拌发酵罐实消方法。

2.在老师的指导下能进行发酵前的准备工作。

3.独立地进行pH电极、DO电极的标定、维护和保养。

二、任务内容

1.配制发酵培养基。

2.灭菌前准备。

3.实罐灭菌操作。

三、相关知识

发酵罐实罐灭菌原理和操作要点。

四、任务需要的仪器设备材料

1.仪器设备　5BGZA型号机械搅拌发酵罐，空气压缩机，BX-2000循环冷冻机等。

2.试剂　邻苯二钾酸氢钾，磷酸二氢钾缓冲液，3MKCl（或饱和KCl），饱和亚硫酸钠。

3.发酵培养基。

五、任务实施

pH电极的零点和斜率标定以及DO电极的零点标定在灭菌之前完成。

（一）配制发酵培养基

配制2L发酵培养基，调好pH值，并倒入发酵罐。

（二）灭菌前准备(www.xing528.com)

1.连接公用管线　按照任务一连接或检查水路和气路管道是否接好。

2.连接罐盖上的接管　①取样阀K8口与平衡口K6用硅胶管连通并放开弹簧夹J2；②排气过滤器K2出口与进气口K5用硅胶管连接放开弹簧夹J3夹紧，防止消毒过程中培养基倒流进入过滤器；③进气过滤器进气口K7用硅胶管连接后用弹簧夹夹紧；④将pH电极装入N17口并用闷帽盖紧电极上端口，防止因电缆插口受潮导致电极故障；⑤将溶氧电极装入N11口并用铝铂纸包裹电极上端口，防止因电缆插口受潮导致电极故障；⑥盖紧其他罐盖接口。

（三）实罐灭菌操作

1.开夹套排气阀V03，开夹套进水阀W03，将夹套注满水，关阀W03和V03，移去蒸汽平衡阀S02。

2.用保护罩盖住发酵罐并用螺钉锁紧法兰，开保护罩顶部排气阀V04。

3.启动搅拌马达，调转速300rpm。

4.开排水阀V01和排气阀V04。

5.在控制器打开灭菌操作画面，设定温度1（电加热关闭温度，通常比T2低3～5℃）、温度2（灭菌保温温度）、温度3（发酵温度），设定保温时间，启动灭菌。

6.当V04口有蒸汽排出时，2分钟后关闭V04，当罐温接近120℃或保温温度时微开阀V04和V03适量排气。保温结束后，关冷凝水阀V02，开排水阀V01，温度将自动降到设定的温度3。

（四）灭菌结束

当温度降至100℃以下，缓缓开排气阀V04（排气过大易损坏排气过滤器），使保护罩顶部的压力表指示为零（保护罩内无压力），移去保护罩。

（五）清场

任务结束，学生按照清场操作规程对设备、房间进行清洁消毒。

六、归纳总结

发酵罐实罐灭菌原理和操作要点。

七、拓展提高

设备常见故障及排除方法。