第二节 犬骨髓细胞的检查程序
一、犬骨髓采集
（一）目的
规范犬的髂骨脊或股骨背侧骨髓采集程序。
（二）程序
1．触及髂骨脊或股骨背（内）侧，准确定位。
2．剪去将穿刺位点的毛。
3．用锋利的解剖刀在穿刺位点上的皮肤做一切口。
4．取一消过毒的采集针，并用已消毒的抗凝剂柠檬酸三钠溶液（3.13g/100ml）冲洗。
5．在股骨或髂骨脊前背角的位点进针，穿过皮肤和肌肉。
6．到达骨膜后，均匀加力并旋转针头、使针刺入骨头。
7．当针头稳固地插入骨头时，它通常已插入骨髓腔中。从针头中取出探针，观察有无骨髓样物质，如有，连接20ml的注射器。
8．抽动注射器，以形成足够的真空以吸取骨髓。
9．当针筒中出现骨髓液时，立即减少真空，以免吸入血液造成骨髓样品稀释。
10．拔出穿刺针，取下注射器，将骨髓液收集于干净的试管或玻璃小瓶中。
11．尽快进行骨髓涂片或骨髓拍片，避免骨髓凝集。
二、骨髓片和涂片的制备
（一）目的
规范骨髓片和涂片的制备。
（二）程序
1．骨髓片
（1）滴一滴骨髓液于已标记好的载玻片一端约1cm处。
（2）用吸管轻柔地从液滴边缘吸掉样品中大部分的血液。这是为了浓缩骨髓细胞，因为它们应该黏附在玻片上。
（3）用一边缘平滑、最多2cm宽的玻璃压片，将骨髓片段制造成一个3～5cm长的片状。
（4）每个骨髓片段应被拖拉在压片的后面形成一条细胞带，在这些细胞带中应进行细胞分类计数，从骨髓片段开始数回片头。这样可以尽量少数外周血细胞。
（5）每个样品应制备数张载玻片（一个样品至少2张）。
2．骨髓涂片(www.xing528.com)
（1）滴一滴骨髓液于已标记好的载玻片一端约1cm处。
（2）用吸管轻柔地从液滴边缘吸掉样品中大部分的血液。这是为了浓缩骨髓细胞，因为它们应该黏附在玻片上。
（3）领取一块载玻片沿第一块载玻片表面轻推骨髓片段。注意不要挤压骨髓片段而引起细胞损伤。
（4）每个样品最少应该制备2张玻片。
3．固定与染色
制备好的骨髓应固定再染色，方法同外周血片。
4．审片（略）
三、骨髓涂片的观察
（一）目的
规范骨髓涂片的观察。
（二）程序
1．审片
（1）如果每个骨髓样品制备了不止1张涂片，可用肉眼进行筛选，选择含有容易可见的骨髓，且组织分散得最好的涂片。
（2）在低倍镜下进行审片，10倍物镜下详细参考它们的细胞结构。决定骨髓是否：①发育不全（细胞结构减少）；②完整（细胞结构正常）；③增生（细胞结构过多）。
（3）使用10倍的低倍物镜，选择细胞较集中、有核细胞分散和染色俱佳的区域。
（4）先用40倍物镜审阅这些细胞区域，接着使用100倍油镜。
（5）阅片的开始阶段应注意寻找巨核细胞，该细胞通常在涂片的尾部较常见。除此之外，对红细胞生成的类型进行评估并对其分类：①正成红细胞；②巨幼红细胞；③红细胞结构破坏。
（6）评价红细胞生成和白细胞生成细胞系的成熟情况。
（7）如果有必要，估计骨髓细胞系与红细胞系的比率。
（8）其他需要特殊注意的对诊断有意义的指标有：①噬红细胞作用（吞噬细胞清除老化的红细胞）；②吞噬性网织细胞数量异常；③退化或坏死细胞；④过量的浆细胞或非造血细胞，例如造骨细胞。
2．报告
每个骨髓样品的审片结果必须记录在骨髓报告表格中。报告应包括结论、概要，还应有阅片人的签名和日期。
3．骨髓报告表
骨髓报告表如表2-4所示。
表2-4 骨髓报告表
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