蛋白质纯化方法，实现高效分离

更准确、更特异的定量方法

隶书;color:black;text-shadow:auto;text-combine:letters;font-weight:bold">★茚三酮反应：氨基酸与茚三酮反应产生蓝紫色化合物

    *蛋白质的末端氨基也有相同反应

    *不能区分蛋白质和游离氨基酸

★双缩脲反应

★Folin-酚试剂

★考马斯亮蓝

三、蛋白质的胶体性质

★蛋白质颗粒的大小位于1~100nm，溶解于水后形成胶体，而非

   真溶液

★胶体溶液的稳定依赖于水膜层与表面电荷

 黑体, SimHei; font-size: 20px;">·表面带有相同的电荷，相互排斥而无法沉淀

 ·表面极性基团与水分子相互作用阻止沉淀

破坏胶体的稳定因素可导致蛋白质沉淀

★盐析(salting out)：

   高浓度的中性盐可破坏水膜，导致蛋白质的沉淀

                        半饱和硫酸铵           饱和硫酸铵

血清    球蛋白沉淀        清蛋白沉淀

★等电点沉淀(isoelectric precipitation)：

   等电点时蛋白不带电而沉淀

★有机溶剂沉淀：

   乙醇、丙酮等夺走水膜层，导致蛋白质沉淀

四、蛋白质的变性和复性(www.xing528.com)

★变性(denaturation)：

   在特定理化因素影响下，蛋白质空间结构发生被破坏的过程

·变性蛋白质溶解度下降，生物学活性丧失

★复性(renaturation)：

   在去除变性因素后，蛋白质恢复其天然构象和生物活性

·空间结构的恢复需要特定的条件

·很多情况下，蛋白质的变性是不可逆的

导致蛋白质变性的因素

★破坏蛋白质空间结构的稳定因素，将导致蛋白质的变性

 ·热变性

 ·有机溶剂、表面活性剂：破坏疏水相互作用

 ·强酸、强碱：破坏离子键

  ·尿素、甲酰胺：破坏氢键

  ·还原剂：破坏二硫键

 ·重金属离子、射线、超声波……

本章的主要内容

★氨基酸的结构通式如何？如何分类和命名？

★什么是肽？肽键是如何形成的？

★什么蛋白质的一、二、三、四级结构？

★蛋白质有哪些二级结构模式？特点如何？

★蛋白质如何维持其三级结构的稳定？

★什么是模体、结构域和亚基？

★如何理解蛋白质结构与功能之间的关系？