LDH活力、浓度和回收率计算方法

本实验反应液中含乳酸和NAD+，在一定条件下，加入一定量酶液，观察反应过程中混合液A340nm的变化，判断LDH的活性。

LDH的活力单位（U）定义：在25℃，pH 10.0条件下，每分钟催化1μmol乳酸转化为丙酮酸所用LDH的量为1 U，1 U=1μmol·min-1。

LDH提取过程中所有预存样品的酶活力、比活力、纯化倍数和回收率的计算公式如下：

式中：

ΔA340nm：溶液在340 nm吸光度的变化量，无单位；

ε：吸光物质的摩尔吸光系数，单位为L·（mol·cm）-1，1 cm吸光皿内吸光物质的摩尔吸光系数为6 220 L·（mol·cm）-1；

b：光程，即光线穿过溶液的距离，通常为比色皿透光面宽度，单位为cm；

t：反应时间，单位为min；(www.xing528.com)

将LDH初始提取液的回收率设定为100%（本实验中以组织匀浆液为LDH初始提取液），其他提取步骤所获得的样品蛋白质回收率为：

例如，LDH粗提匀浆液体积为20 mL，取20μL样品与80μL酶促反应液混合，测得样品混合液在340 nm处每分钟的吸光度为0.31，则LDH活力和相对活力分别为：

总酶活力和初始提取步骤中的回收率分别为：

若用Bradford蛋白浓度测定法检测20μL预先稀释10倍的初始提取液，测得其中蛋白含量为3μg，则样品中：

LDH比活力为：

酶的比活力是指每毫克蛋白质所含的某种酶的催化活力，是用来度量酶纯度的指标。