【摘要】：将剪碎的牛心肌组织与75 mL预冷的0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液混合，置于高速组织匀浆机中匀浆2 min。其余匀浆液以20 000 r/min，在4℃下离心15 min后收集上清液，并预存0.5 mL上清液用于后续检测。向65%饱和度硫酸铵处理后的沉淀中加入5～10 mL 0.03 mol·L-1的N，N-二羟乙基甘氨酸，使沉淀充分溶解。预存0.2 mL沉淀溶解液用于后续实验，其余溶解液移入预先处理的透析袋中。
（1）取牛心肌组织25 g，用剪刀剔除外周脂肪和结缔组织，用预冷的无菌纯净水冲洗干净后剪碎成1 mm×1 mm×1 mm的小块。
（2）将剪碎的牛心肌组织与75 mL预冷的0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液（pH 7.5）混合，置于高速组织匀浆机中匀浆2 min。预存0.5 mL匀浆液用于后续酶动力学实验和蛋白浓度测定。其余匀浆液以20 000 r/min，在4℃下离心15 min后收集上清液，并预存0.5 mL上清液用于后续检测。
（3）将收集的上清液置于冰上，向其缓慢加入研磨成粉的硫酸铵，使组织液中硫酸铵饱和度达40%（0.242 g/mL），冰上静置15 min。15 000 r/min，4℃离心15 min，收集上清液。
（4）预存0.5 mL上清液用于后续实验。其余上清液再次置于冰上，继续缓慢加入硫酸铵，使溶液中硫酸铵饱和度达到65%（0.166 g/mL），冰上静置15 min。15 000 r/min，4℃离心15 min，分别收集上清液和沉淀。(www.xing528.com)
（5）预存0.5 mL上清液用于后续实验。向65%饱和度硫酸铵处理后的沉淀中加入5～10 mL 0.03 mol·L-1的N，N-二羟乙基甘氨酸（pH 8.5），使沉淀充分溶解。
（6）预存0.2 mL沉淀溶解液用于后续实验，其余溶解液移入预先处理的透析袋中。将透析袋放入0.03 mol·L-1的N，N-二羟乙基甘氨酸（pH 8.5）缓冲液中，4℃透析。
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