质粒重组和抗生素抗性利用

我们需要懂得：负责合成RNA的酶，也就是我们前面讲过的“依赖DNA的RNA聚合酶”，它开始合成与DNA的基因互补的mRNA之前，必须和DNA结合。 这个结合不是随便乱来的，一定要有一个专一的位点才行。 这个位点也有一定的DNA序列，和限制性内切酶的位点有点像，但不是回文结构。 在质粒上，这样的RNA聚合酶结合位点原来是有的。 如果我们想叫细菌的“依赖DNA的RNA聚合酶”也把“蛋白A”基因正确地转录成mRNA，就必须把“蛋白A”基因连接在质粒的RNA聚合酶结合位点后面。 这样，RNA聚合酶结合上质粒DNA以后，就会滑动到“蛋白A”基因的DNA上，开始进行mRNA的合成。

为了把“蛋白A”基因的DNA连接到质粒DNA上去，科学家们先找到质粒上在RNA聚合酶结合位点后面有限制性内切酶酶切位点的地方，用那个限制性内切酶把DNA切成单链，做成黏性末端。 同样，把“蛋白A”基因的DNA两端也弄成同样的黏性末端（可以用人工合成的办法，也可以用酶切的方法）。

图21 重组质粒的构建(www.xing528.com)

然后，把切好的质粒DNA和“蛋白A”基因的DNA在适当的溶液中混合在一起，再加入DNA连接酶的溶液，使两段DNA连成一条。 这样就做成了带有“蛋白A”基因的新的质粒，我们叫它“重组质粒”（图21）。 在构建重组质粒的时候，有一点极其关键，就是要让我们的重组质粒带有一定的抗生素抗性，而没有带上“蛋白A”基因的质粒就不带这种抗性。 不过这一点有时没法一步就做到；如果一步做不到，就要通过在含抗生素的固体平板培养基上人工挑选的方法，分几步来做到。