透皮吸收评价方法及其应用

目前，在化妆品功效成分的透皮吸收基础理论及检测这方面，还没有统一的方法和法规，行业主要沿用医药中的理论及检测方法，如：扩散池法是经济合作与发展组织（OECD）指南认可的体外透皮吸收方法；平行人工膜渗透试验（PAMPA）是研究药物通过生物膜吸收的理想体外模型，可用于预测透皮吸收性。另外，胶带粘贴技术和光谱方法也是常用的透皮吸收评价方法。

（一）扩散池法

扩散池法就是将人或动物的离体皮肤安装在扩散池上，定时取接收液，用适宜的分析方法测定有效成分的含量，计算透皮速率来评价化学品的渗透特性。扩散池可分为静态扩散池和动态扩散池两大类，OECD 化学品透皮吸收的体外方法测试指南适用于这两类扩散池模型。静态扩散池有Franz 扩散池和Valia-Chien扩散池两种，其中Franz 扩散池为垂直式扩散池，即皮肤模型将扩散装置分为上下两室，此种扩散池最为常用。

（二）平行人工膜渗透试验

平行人工膜渗透试验（PAMPA）于1998 年由Kanay 等提出，Ottaviani 等在2006 年首次将PAMPA 应用于药物透皮给药吸收的测定，在皮肤扩散的研究中经常应用二甲基硅油模拟皮肤的脂质。PAMPA 的原理是上层含有受试物分子的溶液通过磷脂人工膜渗透到下层不含有受试物的缓冲液中，待扩散完毕，分别吸取上层的受体液和下层的缓冲液，通过紫外分光光度计或HPLC（对于没有发色团的化合物则使用LC/MS）测定分子的含量并依据公式得出有效透过率（图4-3）。PAMPA 基于96 孔板进行药物测定，能够快速检测药物通过被动扩散机制的膜渗透率，高效、灵活，可避开苛刻的细胞实验，具有很大的发展潜力。

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图4-3　平行人工膜渗透试验原理示意图

（三）胶带粘贴技术

角质层是皮肤吸收外界物质的主要屏障，胶带粘贴技术是一种测定角质层中化学物质含量的方法。在一定时间内化学物质在皮肤的特定区域暴露后，用胶带依次逐层除去角质层，再用适当的分析技术确定每个胶带中化学物质的含量。该技术可以同时研究同一个志愿者的多个取样点，适合用于比较生物学研究。

（四）光谱方法

20 世纪90 年代初，基于光散射原理的光谱方法开始作为角质层研究的新方法应用于皮肤渗透性的研究中，其中绝大多数是基于红外光谱和拉曼振动光谱。近年来，共聚焦荧光显微镜的成像技术也得到了发展。光谱方法中比较经典的有傅里叶变换衰减全反射红外光谱法（ATR-FTIR）、共聚焦拉曼显微镜法（confocal Raman microscopy，CRM）、荧光寿命显微成像法（fluorescence lifetime imaging microscopy，FLIM）等。这些光谱方法最大的优点是快速、无创，其中一些方法还可以提供化学物质穿透皮肤的实时数据。