微小RNA在乳腺癌早期诊断中的作用

2008年，Chim等在待产孕妇血浆中首次发现微小RNA，并通过验证胎盘和血浆中存在同种微小RNA，首次为孕期胎儿诊断提供了可能性。这些研究为乳腺癌的诊断和检测提供了新的方向。

1. 人血清中微小RNA来源

对微小RNA的来源，有许多不同解释，Chen等研究发现，13种微小RNA的表达量在乳腺癌组织和血清中呈相反趋势，表明微小RNA可能从乳腺癌细胞或其他途径释放入血。微小RNA可能的来源：①微小RNA 来源于血液中的细胞，如癌细胞、血小板、炎症细胞等细胞的渗漏；②通过微泡或外核体介导的主动转运、RNA结合蛋白通路；③组织损伤引起的被动释放。

2. 乳腺癌患者血清中微小RNA的差异表达

乳腺肿瘤同正常组织之间有174个表达量差别明显的微小RNA，乳腺癌患者同健康志愿者血清中有109个表达量不同的微小RNA，乳腺癌患者肿瘤组织与血清之间只有10个趋势相同的微小RNA，其中3个上调和7个下调，表明只有小部分肿瘤细胞中微小RNA释放进入血液。乳腺癌患者肿瘤与血清中有28个表达趋势相反的微小RNA，其中只有1个微小RNA在肿瘤中下调，在患者血清中上调。根据微小RNA表达水平可以推测，患者肿瘤与血清之间存在不同的分子机制。

乳腺癌的早期检测对乳腺癌早期治疗、预防乳腺癌扩散起重要作用。早期乳腺癌患者血清中致癌基因miR-155、miR-181b、miR-19a、miR-24均为过表达，随着治疗进行，miR-155、miR-181b、miR-19a、miR-24表达水平均明显下调，且高风险患者血液中miR-155、miR-181b、miR-19a、miR-24明显高于低风险乳腺癌患者。治疗期间，高风险患者致癌基因下调水平幅度明显小于低风险患者，经治疗无法像低风险患者一样恢复正常致癌基因水平。临床数据表明，乳腺癌风险程度与四种微小RNA水平吻合，因此，通过检测血清中miR-155、miR-181b、miR-19a、miR-24 表达量的多少可对患者癌症风险程度进行评估。

Zearo等对比98位早期乳腺癌患者和25位健康志愿者血清中微小RNA水平，发现与健康志愿者血清相比，早期乳腺癌患者血清中miR-186、miR-484、miR-29a、miR- 4255p、miR-454、miR-5743p、miR-1403p、miR-222、miR-4835p、let-7b均是过表达，其中乳腺癌患者中，miR-484、miR-222、miR-5743p、miR-29a、miR-195与健康志愿者血清相比差异很大。Wang等发现早期乳腺癌患者与健康志愿者血清相比，miR-21、miR-106a、miR-155均是过表达，miR-126、miR-199a、miR-335表达减少。Schooneveld等对比75位乳腺癌患者和20位健康志愿者血清中微小RNA水平，发现miR-2995p和miR-411均表达减少。(www.xing528.com)

Hu等对肺、乳腺、胃、肝、肠等部位血清中微小RNA表达水平进行检测，发现miR-484、miR-191在所有部位均表达稳定，因此，miR-484、miR-191可作为检测血清中微小RNA表达水平的内源性参照。以miR-484、miR-191作为对照，发现乳腺癌患者血清中miR-16、miR-25、miR-222、miR-3243p表达水平与健康志愿者血清中微小RNA表达水平差异明显。

Wang等对比46位乳腺癌患者和58位健康志愿者中miR-182的表达发现，miR-182在癌组织中表达量明显高于癌旁组织，乳腺癌患者血清中miR-182表达量明显高于健康志愿者。且miR-182的表达水平与雌激素和孕酮激素有关，miR-182表达水平在雌激素阳性、孕酮激素阳性乳腺癌患者中明显低于雌激素阴性、孕酮激素阴性乳腺癌患者。糖类抗原153（CA153）、癌胚抗原（CEA）是检测乳腺癌常用的标志物，但对检测早期乳腺癌均缺少灵敏性和特异性。Gao等通过比较miR-182、糖类抗原153、癌胚抗原发现，血清中miR-182灵敏度明显高于糖类抗原153、癌胚抗原，且在乳腺癌中miR-182表达量高于健康志愿者。

3. 微小RNA具有作为早期诊断乳腺癌标志物的必备条件

到目前为止，生物标志物仍以蛋白为主，如血清甲胎蛋白（AFP）、核基质蛋白22（NMP22）、糖类抗原125、人嗜铬蛋白A（CgA）、前列腺特异性蛋白（PSA）、人体绒膜促性腺激素（HCG）等，由于蛋白受环境影响很大、灵敏度低、特异性差限制了其临床应用。血清和一些体液中存在核糖核酸酶，因此微小RNA的稳定存在说明分泌微小RNA时存在一些保护微小RNA免于酶降解的物质，如脂囊泡、RNA结合蛋白。微小RNA 可以对抗恶劣条件如强酸、强碱、高温、冰冻。Turchinovich等研究表明，微小RNA的稳定性可能和其与蛋白的结合有关。生物活性重组蛋白2（Ago2）是RNA诱导的沉默复合物，对微小RNA沉默起重要作用，Ago2/微小RNA复合物在细胞质中能够稳定存在，因此一些研究人员认为，血液中微小RNA来源于死细胞。核仁磷酸蛋白（NPM1），一种RNA结合蛋白，对细胞外微小RNA具有保护作用，Wang等证明，NPM1可保护miR-122免于核糖核酸酶A的降解，但仍需证明NPM1是否特异性作用于miR-122。中性鞘磷脂2（nSMase2）、高密度脂蛋白可转运血液中微小RNA。

微小RNA可于不同种属中获得，来源广泛，并可根据其水平变化可判断疾病的发生。

基于以上条件，微小RNA极有可能作为乳腺癌早期诊断的标志物。