【摘要】：本书中碱性磷酸酶活性测定方法采用分光光度法[163]。其主要利用碱性磷酸酶可将硝基苯酚磷酸二钠水解为黄色的对硝基苯酚的特点，从而进一步利用分光光度测定间接判断碱性磷酸酶的活性。样品中存在碱性磷酸酶，外加底物PNP-P后，经一定反应时间产生黄色PNP，而PNP的产生速率即为碱性磷酸酶活力大小的指标，其酶活单位为nmol·L－1·min－1，测定步骤如下：将0.113 g对硝基苯磷酸二钠溶于水并稀释至1 L，制得0.3 mmol/L的对硝基苯磷酸二钠溶液。
本书中碱性磷酸酶活性测定方法采用分光光度法[163]。其主要利用碱性磷酸酶可将硝基苯酚磷酸二钠（PNP-P）水解为黄色的对硝基苯酚（PNP）的特点，从而进一步利用分光光度测定间接判断碱性磷酸酶的活性。样品中存在碱性磷酸酶，外加底物PNP-P后，经一定反应时间产生黄色PNP，而PNP的产生速率即为碱性磷酸酶活力（APA）大小的指标，其酶活单位为nmol·L－1·min－1，测定步骤如下：
将0.113 g对硝基苯磷酸二钠溶于水并稀释至1 L，制得0.3 mmol/L的对硝基苯磷酸二钠溶液。将12.114 g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶解到80 mL水中，并用1.0 mol/L盐酸将溶液pH调至8.4左右，加水稀释至100 mL制得Tris缓冲溶液。取0.2 g 2， 6-二溴苯醌氯酰亚胺，并用10 mL 96%乙醇溶解，进一步稀释至100 mL制得Gibbs试剂。取1.391 g硝基苯酚溶于蒸馏水中，并稀释至1 L制得硝基苯酚标准母液，取10 mL母液稀释至1 L得到硝基苯酚工作液。取50 mL比色管，加入5 mL水样及5 mL对硝基苯磷酸二钠溶液，用Tris缓冲液调节pH至8.4，在30 °C的恒温箱中培养6 h；取出比色管并加入5 mL Tris缓冲液和1 mL Gibbs试剂，用二蒸水稀释至50 mL刻度线，静置30 min后在410 nm波长处测定吸光度。(www.xing528.com)
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