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紫外-可见光谱是用紫外-可见光测获的物质电子光谱。它研究物质分子的价电子在电子能级间跃迁吸收的光谱，当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以A 为纵坐标、波长λ 为横坐标作图，可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190～400 nm，可见光区为400～800 nm。紫外吸收光谱的定性分析可为化合物的定性分析提供信息依据。分子结构不同的物质，只要具有相同的生色团，它们的最大吸收波长就相同。
最新设计的UV-1801 是通用型具有扫描功能的紫外-可见分光光度计，可满足各种应用的要求，可用在生物研究、生物工业、药物分析、制药、教学研究、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域。
安全提示
（1）紫外-可见分光光度计仪器使用规范，注意用电安全。
（2）容量瓶、移液管等玻璃仪器使用过程注意安全。
一、实训目的
（1）了解UV-1801 紫外-可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。
（2）掌握紫外分光光度法定性、定量分析的基本原理和实验技术。
二、实训原理
通过对未知化合物的扫描光谱、最大吸收波长与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。利用紫外吸收光谱进行定量分析时，必须选择合适的测定波长。根据朗伯-比尔定律进行定量分析。水杨酸的紫外吸收光谱如图6-1 所示。
图6-1 水杨酸光谱吸收曲线
水杨酸在波长230 nm、300 nm 处有吸收峰，为了避开干扰，选用300 nm 波长作为测定水杨酸的工作波长。由于乙醇在250～350 nm 无吸收干扰，因此可用60%乙醇为参比溶液。
三、实训用品及准备
1.实训仪器
表6-5 紫外分光光度法测定水杨酸含量实训仪器
2.实训试剂
表6-6 紫外分光光度法测定水杨酸含量实训试剂
四、实训内容
（1）标准溶液的制备：准确称取0.100 g 水杨酸置于100 mL 烧杯中，用60%乙醇溶解后，转移到100 mL 容量瓶中，以60%乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为1 mg/mL。稀释至200 μg/mL 标准使用液。
（2）将5 个50 mL 容量瓶按1～5 依次编号。分别移取水杨酸标准使用液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL 于相应编号容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀释至刻度，摇匀。
（3）用1 cm 石英吸收池，以60%乙醇作为参比溶液，在波长200～350 nm 测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。
（4）在选定波长下，以 60%乙醇为参比溶液，由低浓度到高浓度测定水杨酸标准溶液系列吸光度。以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制标准曲线。
（5）相同条件下测量稀释未知液的吸光度，根据水杨酸试液的吸光度，通过标准曲线及稀释倍数计算水杨酸试样中水杨酸的含量。(www.xing528.com)
五、数据记录与处理
（1）数据记录
根据某一浓度下的全波长扫描图，确定最佳吸收波长____________。
表6-7 标准曲线制定数据记录
表6-8 未知浓度溶液测定数据记录
（2）计算未知样中水杨酸的浓度。
参考公式：
式中 C0—— 原始未知液的浓度，μg/mL；
Cx—— 标准曲线上查得的未知液的浓度，μg/mL；
n—— 样品溶液稀释为供试液的倍数。
六、注意事项
（1）配制样品前要将所使用的玻璃仪器清洗干净。
（2）移取标准溶液之前要润洗移液管。
（3）测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。
七、实训评估
表6-9 紫外分光光度法测定水杨酸含量实训评估
八、拓展练习
（1）综述紫外吸收光谱分析的基本原理。
（2）归纳影响紫外光谱定性、定量检测的各种误差影响因素。
（3）为什么选用300 nm 而不选用230 nm 波长进行水杨酸的定量分析？
（4）本实验为什么用60%乙醇做参比溶液？
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