实验红鲫近交系培育及应用研究

采用经紫外线照射的鲤鱼精子或鳊鱼精子激活红鲫卵子的人工雌核发育繁殖技术，于2001年建立了实验红鲫近交系——实验红鲫C1HD系。实验红鲫近交系的培育符合实验动物标准化研究要求。现将近交系的培育过程简述如下。

1.实验动物

红鲫（Carassius auratus red variety）和湘江野鲤（Cyprinus carpio xiangjiang variety）均取自于湖南省湘阴县东湖国有良种鱼类繁殖场，都是有档案记载的2龄鱼，其中红鲫为封闭群。

2.试验方法

（1）人工诱导雌核发育

以体色全红的红鲫作为母体，以湘江野鲤的精子作为激活源。用紫外线处理精子，用冷休克进行卵子染色体数目加倍。具体操作如下：在生殖季节（5月）按常规方法注射激素获得红鲫卵子和鲤鱼精液。鲤鱼精液用2～4倍体积的Hank's液稀释。被稀释的鲤鱼精液置于干净的培养皿中，其厚度为0.1～0.2mm，移于2支15W的紫外灯（波长为2537A）下，灯管与精液面的垂直距离为12cm，开启紫外灯照射45min。照射过程中，盛精液的培养皿放在冰盘上，冰盘又放在小摇床上，不停地缓慢摇动，以便精液在低温下被均匀照射。经照射的精液立即置于4℃冰箱中备用，并涂片镜检精子活动能力（应有约80%的精子具有良好的活动能力）。对照组精液不经紫外线照射，其他与试验组相同。红鲫卵子置于干净的培养皿中，立即用经紫外线照射的鲤鱼精子进行人工授精，以激活卵子发育。在精卵相遇后1min开始进行冷休克处理，即将培养皿移入冰箱后，用3～4min时间使激活卵子由环境温度降低到冷休克温度（0～4℃），再经过冷休克（0～4℃）处理30min后，从冰箱中取出，使其回升到环境温度。对照组红鲫卵子与鲤鱼精子按常规方法进行人工授精。激活卵或受精卵均置于解剖盘中静水孵化，每日换水2～3次。

（2）雌核发育红鲫的鉴别与选择

红鲫具有红色体色的隐性遗传标记。根据以往的试验，红鲫母本与鲤鱼父本杂交产生的杂交一代都是青灰色体色的鱼。因此，如果在试验组中出现红色的鲫鱼即判定为雌核发育红鲫。将试验组获得的鲫鱼饲养3个月以上（通常红鲫体色均已变红），计数统计雌核发育红鲫，置单独鱼池饲养。(www.xing528.com)

（3）性别及能育性鉴定

在生殖季节检查雌核发育红鲫是否产生精子或卵子以及精卵结合后能否发育成有生活力的鱼苗来确定。

（4）实验红鲫近交系（C1HD系）的育种繁殖

从封闭群挑选满意的雌性红鲫1尾，用以上方法人工诱导雌核发育，再从第一代中的红鲫雌核发育二倍体中挑选满意的雌性红鲫1尾，用同样的方法繁殖出第二代雌核发育二倍体，最后从第二代红鲫雌核发育二倍体中，选择体色全红、体形一致、健康的个体100尾组成红鲫近交系基础群。以后采用人工雌核发育的繁殖方式进行保种，采用随机交配繁殖1～2代的方式生产供试验。

（5）实验红鲫近交系的生物学特性检测

按伍献文等方法测量形态学指标，并用生物统计方法进行统计分析。另外还进行了血细胞及血液生化指标、染色体组型、同工酶等分析。近交系红鲫的生物学特性、血细胞、血液生化、染色体组型、同工酶等特性见第二章第二节、第三节、第四节。