硬毛栓孔菌：本实验室保藏；硬毛栓孔菌多糖发酵条件：麦芽糖5%（质量体积比），胰蛋白胨0.2%（质量体积比），KH2PO43mmol/L，pH6，温度为28℃，装液量50mL（250mL三角瓶），转速为150r/min，发酵周期为10d。
硬毛栓孔菌发酵结束后，通过真空抽滤法分离菌丝体和发酵液，菌丝体干燥至恒重并称量保存。发酵液旋转蒸发到一定体积后加入4倍体积乙醇，4℃冰箱存放过夜，进行多糖沉降。10000r/min离心15min得到粗多糖；然后用Sevag法对粗多糖进行脱蛋白处理得精制多糖。
称取精制多糖80mg，用4mL 0.2mol/L NaCl缓冲液溶解，离心，上清液过0.45μm的滤膜；用2～3mL上Sepharose CL－6B柱，以0.2mol/L NaCl缓冲液洗脱并分管收集，用硫酸－苯酚法对各管多糖含量进行检测；分离组分用旋转蒸发仪浓缩至50mL，然后透析（透析袋分子质量8000～14000）除去NaCl，将透析后的溶液冷冻干燥，得到两个多糖组分（1）和多糖组分（2）。
硬毛栓孔菌多糖的红外光谱（IR）检测。
取多糖组分（1）和多糖组分（2）各1mg，用溴化钾（KBr）压片后进行红外（IR）分析。
将处理好的多糖样品上柱，以0.2mol/L NaCl缓冲液洗脱，并分步收集，之后用硫酸－苯酚法测定多糖含量，以管号为横坐标以多糖吸光度为纵坐标用SigmaPlot软件作图，结果如图10.1所示。
图10.1 硬毛栓孔菌多糖过Sepharose CL－6B柱结果(www.xing528.com)
如图10.1结果所示，将硬毛栓孔菌多糖过Sepharose CL－6B柱可得到两种不同分子质量的多糖组分。重复过柱5次，将五次所得到的两个组分分别收集起来，用旋转蒸发仪浓缩至50mL左右，然后将得到的不同多糖溶液分别装入透析袋（截流相对分子质量为8000～14000），于蒸馏水中透析三天除去NaCl，期间每隔8h换一次蒸馏水；将透析后的溶液冷冻干燥，得到多糖组分（1）和多糖组分（2）。
对硬毛栓孔菌多糖组分（1）和（2）进行红外光谱监测得红外光谱图（见图10.2）。对两种多糖组分的红外光谱图的解析结果见表10.1。
图10.2 硬毛栓孔菌多糖组分红外光谱图
表10.1 多糖的红外光谱图解析结果
从硬毛栓孔菌多糖组分红外光谱图①和②的特征吸收波数可知，在3412cm－1有一特征峰，因为O—H的伸缩振动在3600～3200cm－1出现一宽峰，在该糖中应存在—OH；在波数2929cm－1处有一特征峰，是C—H键的伸缩振动，是糖类的特征吸收；在1.73×103cm－1和1.25×103cm－1左右有吸收峰，说明有乙酰基的存在；多糖在1646cm－1为C═O非对称伸缩振动，在1646cm－1和1085cm－1左右存在吸收峰，说明有羧酸存在，为酸性多糖，在796cm－1处存在吸收峰，为甘露糖结构；910cm－1和880cm－1处有吸收峰，说明多糖①和②应有α和β糖苷键。
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