采用清除有机自由基DPPH法评价多糖的抗氧活性,DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其结构中含有3个苯环,1个N原子上有1个孤对电子,其醇溶液呈深紫色,在波长为517nm下具有最大光吸收。有自由基清除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大光吸收波长处的吸光值下降,且下降的程度呈线性关系,从而以评价试验样品的抗氧化能力。具体方法如下:
(1)2mL多糖溶液及2mL浓度为0.1g/L的DPPH 50%乙醇溶液先后加入同一试管中,摇匀,25℃放置1h,以50%乙醇溶液为空白在517nm波长下测定其吸光度Ai。
(2)2mL浓度为0.1g/L的DPPH 50%乙醇溶液及2mL蒸馏水混合,摇匀,25℃放置1h,以50%乙醇溶液为空白在517nm波长下测定其吸光度A0。
(3)2mL多糖溶液及2mL 50%乙醇混合,摇匀,25℃放置1h,以50%乙醇溶液为空白在517nm波长下测定其吸光度Aj。
根据下列公式计算多糖对DP P H的清除率,即
式中 Ai——加入抗氧化剂后DPPH溶液的吸光度;
A0——未加抗氧化剂时DPPH溶液的吸光度;(www.xing528.com)
Aj——多糖溶液在测定波长时的吸光度。
引入Aj是为了清除多糖溶液本身颜色对测定的干扰。清除率越大,抗氧化活性越高。
以柽柳多糖及维生素C的含量(单位:g/L)为横坐标,对DPPH自由基的清除率为纵坐标得到下图:
如图9.4所示中可看出柽柳核纤孔菌多糖对DP P H自由基的清除率明显;在3g/L的时候达到34.66%,但是与相同浓度的维生素C相比,还是有些低。我们知道维生素C有很强的清除自由基的能力,由此我们可以看出柽柳核纤孔菌多糖对DP P H自由基的清除能力还是比较高的。
图9.4 柽柳核纤孔菌多糖及维生素C对DPPH自由基清除率对比图
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