柽柳核纤孔菌：基因号HM050416，郑州轻工业学院微生物学实验室保藏；柽柳核纤孔菌胞外多糖发酵条件：温度25℃，碳源为蔗糖，氮源为胰蛋白胨，pH为8；蔗糖浓度为64.090g/L，胰蛋白胨含量为5.240g/L，装液量50mL（250mL三角瓶），转速为150r/min，发酵周期为12d。
柽柳核纤孔菌发酵结束后，发酵液经SHB－3循环多用真空泵真空抽滤，得到菌丝体及发酵滤液，菌丝体经65℃，24h干燥至恒重，冷却、称重，得到干燥菌丝备用。发酵滤液测其pH后，经旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3，加浓缩液四倍体积的无水乙醇，保持乙醇浓度在70%以上。4℃静置过夜，10000r/min冷冻离心10min，得到沉淀加适量蒸馏水溶解后，加入1/3的氯仿/正丁醇（5∶ 1），磁力搅拌器剧烈搅拌30min；静置10min后，取上层水相。共重复三次。水相经浓缩后，再次加4倍无水乙醇，4℃沉降一夜。10000r/min离心10min，取沉淀，然后用Sevag法对粗多糖进行脱蛋白处理得粗多糖。
称取粗多糖100mg，用10mL 0.2mol/L NaCl缓冲液溶解，离心，上清液过0.45μm的水膜，取5mL上Sepharose CL－6B柱，以0.2mol/L NaCl缓冲液洗脱，流速为0.6mL/min，缓冲液洗脱并分管收集，145滴/管，用硫酸－苯酚法对各管多糖含量进行检测。所得到的组分分别收集起来，用旋转蒸发仪浓缩至50mL，然后透析（透析袋分子质量8000～14000）除去NaCl，将透析后的溶液冷冻干燥，得到精多糖。
用硫酸－苯酚法检测多糖，用紫外－可见分光光度计在波长490nm处检测多糖含量，在波长280nm处直接检测蛋白，得到1个组分，以管号为横坐标以多糖吸光度为纵坐标用SigmaPlot软件作图，结果如图9.1所示。
图9.1 柽柳核纤孔菌发酵多糖经Sepharose CL－6B柱后多糖和蛋白的测定结果［●多糖（EPS）；〇蛋白质］
取精多糖1mg，用溴化钾（KBr）压片后进行红外（IR）分析。(https://www.xing528.com)
取层析后多糖50mg左右分别装入核磁管中，加入0.5mL重水，在核磁共振仪上经行1H－NMR光谱分析。
如图谱9.2所示，它具有多糖的共同吸收峰，在2925cm－1有峰值表明有其吸收较弱是一种分子中C—H键的弯曲振动。在3414cm－1有一特征峰，1457cm－1和1386cm－1处有峰值表明有偕二甲基。在2361.2cm－1、2335.9cm－1处有吸收峰，应为C ═N或C ═C伸缩振动，O—H的伸缩振动在3600～3200cm－1，在3421cm－1出现一宽峰表明该糖中存在O—H；在1419cm－1，1051cm－1处有吸收峰，应为C—O伸缩振动引起的。从1652cm－1和1051cm－1处有吸收峰，说明有羧基存在。
1H－NMR以HDO峰4.69mg/kg为内标，13C－NMR以TMS（四甲基硅烷）峰为0.00mg/kg为内标进行核磁共振检测。结果如图9.3所示，柽柳核纤孔菌发酵多糖的1H－NMR见δ4.92为α－D－葡萄糖的端基氢信号，δ4.86为β－甘露糖端基氢信号，在1.18处有氢信号，在此处可以证明有羧基的存在，更加证明了其为酸性多糖。
图9.2 柽柳核纤孔菌发酵多糖的红外光谱图
图9.3 柽柳核纤孔菌发酵多糖的核磁共振氢谱
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
