纳米材料细胞毒性研究结果揭示

（1）细胞培养 本研究中使用的两种人细胞系（A549和SH－SY5Y）获自美国保藏中心（马纳萨斯，弗吉尼亚州，美国）。A549肺腺癌细胞系培养基为Ham's F－12K。SH－SY5Y人神经母细胞瘤细胞系培养基为MEM，补充1% MEM非必需氨基酸和L－谷氨酰胺（2mmol/L）。两种细胞系培养基中均含10%（体积分数）的胎牛血清，10U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。细胞置于培养箱中培养，温度37℃，5% CO₂。

（2）细胞存活率的检测 采用MTT法测定细胞存活率。用胰酶消化贴壁细胞3min，重悬后以每孔10000个细胞接种于96孔培养板，置于培养箱中（37℃，5% CO₂）。孵育24h后，用PBS清洗两次再每孔加入200μL新鲜培养基，实验组每孔加20μL不同浓度的试样孵育24h、48h或72h后，每孔加入20μL MTT（5mg/mL）溶液，继续放于培养箱中孵育4h，弃上清液，每孔加入200μL DMSO，振荡混匀，待紫色结晶充分溶解后，用自动酶标仪（FLUOstar OPTIMA，BMG，Germany）检测490nm处比色检测每孔光强度（OD）值。细胞的存活率通过（OD_490，sample/OD_{490，control}）×100%计算，OD_490，sample为加入试样的各实验组的光强度，OD_{490，control}为对照组（PBS）的光强度。EC50（50%有效浓度）采用GraphPad Prism v4.0软件计算得出。

图7.5 不同ZnO－多糖纳米复合物［图1～图4依次为PS1－ZnO，PS2－ZnO，PS5－ZnO，PS10－ZnO］对两株细胞（A549和SH－SY5Y）的毒性(www.xing528.com)

我们采用MTT法测定不同ZnO－多糖纳米复合物的细胞毒性。加样处理24h，不同的纳米复合物（10～200μg/mL）的细胞毒性示于图7.5中。有趣的是，PS－ZnO材料诱导的对SH－SY5Y和A549细胞毒性剂量依赖性在浓度高于50μgmL^－1后才具有统计学意义（p＜0.001），低于50μgmL^－1均未显示明显细胞毒性。半抑制浓度EC50值之间没有显著差异，均大于文献报道的氧化锌纳米粒子，说明我们合成的ZnO－多糖纳米复合物具有较好的生物相容性。