桑黄多糖：抗肿瘤活性研究成果

选择的肿瘤细胞为宫颈肿瘤细胞（Hela）和肝癌细胞HepG2。细胞培养采用DMEM培养基，含10%胎牛血清（FBS），100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。细胞置于培养箱中培养，温度37℃，5%CO₂。采用MTT法测定细胞存活率。用胰酶消化贴壁细胞3min，重悬后以每孔6000个细胞接种于96孔培养板，置于培养箱中（37℃，5% CO₂）。孵育24h后，用PBS清洗两次再每孔加入200μL新鲜培养基，实验组每孔加20μL不同浓度的试样孵育48h后，每孔加入20μL MTT（5mg/mL）溶液，继续放于培养箱中孵育4h，弃上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡混匀，待紫色结晶充分溶解后，用自动酶标仪（Bio－Rad，Model 550，USA）检测570nm处比色检测每孔光强度（OD）值。细胞的存活率通过（OD_570，sample/OD_{570，control}）×100%计算，OD_570，sample为加入试样的各实验组的光强度，OD_{570，control}为对照组（PBS）的光强度。

用不同浓度的杨黄多糖分别处理两株肿瘤细胞48h后，肿瘤细胞存活率如图4.7所示，两种多糖在0.625～100μg/mL的浓度范围内对肿瘤细胞的增殖的抑制效果呈线性增强。PV－B和PV－W在HeLa细胞上的细胞存活率分别为68.5%和41.1%，PV－B和PV－W对HepG2细胞的最高抑制率分别为78.0%和41.6%。观察到PV－B对HepG2细胞的抑制作用最强，IC50值为13.5μg/mL（PV－W的IC50值为176μg/mL）。PV－B和PV－W对HeLa细胞的抑制作用的IC50值分别为33μg/mL和153μg/mL。PV－B对HepG2和HeLa细胞的抑制作用均高于PV－W。徐等人报道了从香菇中提取的支链β－（1，3）－葡聚糖（LNT）LNT启动了caspase依赖性途径以诱导体内细胞凋亡，并且p53依赖性信号通路在体外抑制细胞增殖。相应地，怀疑P V－W和P V－B抑制肿瘤细胞的细胞增殖而不是直接杀死细胞。关于PV－W和PV－B的抗癌活性机制，包括细胞介导的免疫应答，正在进一步开展工作。

多糖的抗肿瘤活性与其化学结构和链构象以及它们的物理性质有关。因此，多糖的生物活性差异可能与它们在水中的不同溶解度，支化率，化学结构，分子质量和链构象有关。尽管仍然难以阐明复合多糖的结构与抗肿瘤活性之间的关系，但已经提出了一些解释。已经发现，在真菌细胞壁中普遍存在的β－葡聚糖具有抗肿瘤活性和其他生物活性，例如抗HIV活性、抗氧化和免疫调节。PV－B不仅是β－葡聚糖，而且还具有比PV－W更灵活和扩展的链结构。PV－B的其他结构特质，例如在水中的良好溶解性和适度的分子质量，可以促使P V－B具有更多结合细胞膜的机会，如图4.8所示，导致其对癌细胞系的细胞毒性高于PV－W。(www.xing528.com)

图4.7 热水及碱提杨树桑黄多糖（PI－W和PI－B）抗肿瘤活性

图4.8 热水及碱提杨树桑黄多糖（PI－W和PI－B）的构效关系示意图