1.油镜的使用方法
(1)显微镜放置:右手紧握镜臂，左手托稳镜座，将显微镜放置于座前桌面偏左、距离桌沿10 cm左右的位置。
(2)打开电源开关，调节光线到合适亮度。
(3)标本放置:下降镜台或上升镜筒，将标本放置于镜台上，用标本夹夹稳，调节标本移动旋钮使标本被观察部位位于通光孔正中央。
(4)先用低倍镜(10×、40×)观察，找到合适的视野。
(5)油镜观察:在标本上滴加一小滴香柏油，转动物镜转换器为油镜。从侧面仔细观察，缓慢降低油镜镜头，让油镜浸入香柏油油滴中并使镜头贴紧标本载玻片(同时注意观察避免贴压过紧造成镜头和标本的损坏)。然后目视目镜镜筒，缓慢调节粗调节旋钮上升油镜镜筒到可见模糊物像，然后调节微调节旋钮直至物像清晰。
(6)油镜的清洁:用完油镜后，先用擦镜纸将油镜镜头及标本上的香柏油擦除，再用擦镜纸蘸取无水乙醇和无水乙醚(3∶7或4∶6)的混合擦镜液沿一个方向擦拭镜头，最后再用干净擦镜纸擦拭干净。
(7)显微镜使用结束后，调节亮度旋钮至最低，关闭电源，镜头旋成“8”字形，罩好罩布存放。
2.细菌基本形态观察
(1)球菌观察:油镜下观察金黄色葡萄球菌、八叠球菌装片并对其基本形态绘图(注意观察细菌细胞大小、染色、排列方式)。
(2)杆菌观察:油镜下观察实验室常见细菌大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的装片，对其基本形态绘图(注意观察细菌细胞大小、染色、排列方式)。
(3)螺菌观察:油镜下观察螺菌装片，对其基本形态绘图(注意观察菌体大小及染色情况)。
3.细菌特殊结构观察
(1)荚膜观察:油镜下观察固氮菌装片荚膜情况并绘图(注意荚膜与菌体关系、荚膜与菌体的染色差异及荚膜大小)。
(2)鞭毛观察:油镜下观察变形杆菌、螺菌装片鞭毛并绘图(注意鞭毛染色、位置、数目、形状和大小)。
(3)芽孢观察:油镜下观察巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破伤风梭菌装片芽孢特征并绘图(注意芽孢和菌体的染色差异、芽孢形状、大小和位置)。
4.常见细菌的菌落特征观察(www.xing528.com)
对接种于平板培养基上的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌菌落特征进行观察。
5.细菌的革兰氏染色
分别取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌菌液制作涂片后进行革兰氏染色，然后油镜下镜检观察染色结果。
(1)涂片的制作:持接种环在酒精灯火焰上充分灼烧灭菌，待接种环冷却后从菌液试管中取一滴菌液，在洁净的载玻片上涂开，做成薄层的菌体涂膜。
取斜面或平板上的固体培养物时，先在洁净的载破片上滴1滴无菌水，然后用无菌接种环挑取少量菌体，置于水滴中涂散并与水充分混匀，做成薄层涂膜。
注意革兰氏染色时涂片不宜过厚且以选用处于对数生长期的细菌为宜(染色结果典型)，否则容易出现假阳性或假阴性结果。
(2)干燥:让菌体涂膜在空气中自然干燥。
(3)热固定:手持载玻片一端，使有菌膜一面向上，在酒精灯火焰上连续通过三个来回，注意用手背触摸载玻片反面以不烫手为宜，或者借助镊子和载玻片架完成热固定操作，以免烫伤。加热时注意不要将载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂。通过加热使细胞固定在载玻片上，可防细菌在染色后冲洗步骤中被冲走，同时也可以杀死大多数细菌并且不破坏细胞形态。
(4)结晶紫初染:滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上，覆盖菌膜，染色计时1 min。
(5)水洗:先将自来水或洗瓶打开至水滴连续滴下状态，手持斜置玻片，使水滴滴于装片菌膜上方，洗涤液缓和流下。洗至基本无紫色液流出为止。切勿用水直接在菌膜处冲洗。将玻片上水渍轻轻甩落，用吸水纸将载玻片周围水渍吸干。
(6)碘液媒染:滴加几滴卢戈氏碘液覆盖涂片，媒染计时1 min，水洗，方法同上。
(7)95%乙醇脱色:倾斜装片，从菌膜上方连续滴加95%的乙醇，直至流出的乙醇无紫色时，停止脱色(或至多脱色30 s)，然后立即水洗。
(8)番红复染:滴加番红染液覆盖菌膜，复染2 min左右，然后水洗。
(9)吸干:用吸水纸平折包住装片，轻轻按压，吸干液体；
(10)油镜镜检:不加盖玻片，直接滴加一小滴香柏油，油镜下镜检观察。
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