平板划线接种法是微生物分离培养的常用技术，其目的是将混杂的微生物在琼脂平板表面充分地分散开，使单个微生物能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。平板划线接种法是用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌培养平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，其中以分段划线和连续划线法较为常用。
1.分区划线接种法(分段划线接种法)
(1)右手拿接种环，通过酒精灯烧灼灭菌，冷却后，从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种中蘸取少量菌样。左手抓握琼脂平板(让皿盖留于桌上)，在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入。用蘸过菌的接种环在平板培养基的一边涂抹面积约0.5 cm2区域，作为原始区，并将接种环上剩余的菌烧掉。待接种环冷却后，通过原始区进行密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/4左右，此为第1区。划线时接种环与琼脂平板呈40°～45°角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
(2)转动培养皿约90°，并将接种环上多余的细菌进行烧灼灭菌，待冷后，压1区末端的2～3条线，划下一区域(约占1/4面积)，此为第2区。
(3)第2区划完后可不烧灼接种环(每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定)，用同样方法划第3区、第4区，划满整个平皿(图Ⅵ－1)。
(4)划线完毕，将平板扣入皿盖，并做好标记，置37℃培养箱培养18～24 h，观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征(如大小、形状、透明度、色素等)。(www.xing528.com)
图Ⅵ－1 分区划线接种法
2.连续划线接种法
用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面作连续的平行划线(图Ⅵ－2)。划线完毕后，盖上皿盖，并做好标记，置于37℃培养箱中培养18～24 h，观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征(如大小、形状、透明度、色素等)。
图Ⅵ－2 连续划线接种法
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