分光光度计操作及测量步骤

分光光度计分为红外、紫外-可见、可见分光光度计等几类，有时也称之为分光光度仪或光谱仪。可见分光光度计用于可见光吸光光度法测定，较普遍使用的有721B型、722型和7220型，下面简单介绍7220型分光光度计。

6.2.1　分光光度计基本原理

分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应。物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都具有各自吸收光谱，因些当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度、溶液的厚度有一定的比例关系，即符合朗伯-比尔定律。

其中：T——透射比；

　　　I0——入射光强度；

　　　I——透射光强度；

　　　A——吸光度；

　　　K——吸收系数；

　　　l——溶液的光径长度；

　　　c——溶液的浓度。

从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时，透射光是随溶液的浓度而变化的，分光光度计就是根据上述物理光学现象而设计的。

6.2.2　 7220型分光光度计的结构

7220型分光光度计采用寿命较长的钨灯作光源（W），由其发出的复合光经聚光镜、滤光片、保护片，汇聚在入射狭缝上，入射光被平面反射镜反射到准直镜后变成平行光束，再经光栅色散、准直镜聚焦、出射狭缝后，成为单色光。单色光由透镜汇聚，透过试样池，到达接受器光电管。光电管将光信号转变为电信号，电信号经放大器放大后，由转换器将模拟信号转换为数字信号，送往单片机处理，处理结果通过显示屏显示出来。使用者则通过键盘输入指令。图6-5为仪器的外形图，图6-6为操作键盘示意图。(www.xing528.com)

6.2.3　使用方法

（1）仪器预热　接通电源，打开电源开关，推开试样室门（改进型不需打开，直接将试样池拉手推到底即可，此时，光被试样池架挡住），按“方式选择”，使“投射比（即T）”灯亮，仪器显示数字即表示正常。然后让仪器预热10分钟左右。

图6-5　仪器的外形图

1.显示窗　2.样品室门　3.波长显示窗　4.波长调节旋钮　5.样品池拉手　6.仪器操作键盘

图6-6　7220型分光光度计操作键盘

1.功能指示灯　2.方式选择　3.100.0%T，ABS0　4.0%T　5.选标样数　6.置数加　7.置数减　8.确认　9.打印

（2）测定透射比　调节波长旋钮至所需值，将装有参比溶液的比色皿置于试样池架中（注意：比色皿透明的面朝向入射光，手拿毛玻璃面），关上试样室门。将参比溶液拉至光路中，按“100.0%T”键，使其显示为“100.0”。打开试样室门，看显示屏是否显示0.00，若不是则按“0%T”键，使其显示为“0.00”。重复此两项操作，直至仪器显示稳定。然后将待测溶液依次拉入光路，读取各溶液的透射比。注意每当改变波长时，都应重新用参比溶液校正投射比“0.00”和“100.0%”。

（3）测定吸光度　在用参比溶液调好T“100.0%”和“0.00”后（如第2步），按“方式选择”键，选择“ABS”，再将待测溶液依次拉入光路，在显示屏上读出各溶液的吸光度。通过测定标准溶液和未知溶液的吸光度，绘制A-c工作曲线，根据未知溶液的吸光度可从工作曲线上找出对应的浓度值。作图时应合理选取横坐标与纵坐标数据单位比例，使图形接近正方形，工作曲线位于对角线附近。

（4）浓度直读　在如（2）用参比溶液调好T“100.0%”和“0.00”后，按“方式选择”，使“C0”指示灯亮，将第1个标准溶液拉入光路，按“选标样点”至“1”亮，再按“置数加”或者“置数减”使显示屏显示该标准溶液的浓度值（或其整数倍数值），按“确认”。再将第2个标准溶液拉入光路中，按“选标样点”至“2”亮，再按“置数加”或者“置数减”使显示屏显示该标准溶液的浓度值（或其同标准溶液1的整数倍数值），按“确认”。如此操作，可再将第3个标准溶液的浓度输入。然后将待测的未知溶液置光路中，按“方式选择”，使“conc.”指示灯亮，显示屏即显示此溶液的浓度值（或其整数倍数值）。用这种方法，可在输入1个或2个标准溶液浓度后测未知溶液浓度。该仪器最多允许设3个标准溶液。

（5）还原仪器　仪器使用完毕，关闭电源，拔下电源插头，取出比色皿，洗净，使仪器复原。然后盖上防尘罩，并进行仪器使用情况登记。