案例导入
案例：2014年10月到11月，南京市食品药品监督管理局开展了“罗丹明B”非法添加专项检查行动。罗丹明一种工业染色染料，会直接危害人体健康，具有潜在的致癌性和心脏毒性。专家建议，颜色鲜红呈油浸、亮澄澄状态以及很容易掉色的辣椒制品不要购买。从检查情况来看，染色的辣椒制品主要存在于批发市场和一些小的食品店，基本上都是散装的，市民购买时要特别小心。业内人士说，正常的辣椒面干燥、松散，粉末为油性，颜色自然，呈红色或红黄色，不霉变，不含杂质，无结块，无染手的红色特点。而经过染色的，颜色会非常鲜艳，红得不自然，但辛辣味却不强烈。正常辣椒面的红色是一种植物性的色素，存放久了，颜色会慢慢黯淡下来。但染过色的，即使曝晒仍会很鲜红。
讨论：1.为何要非法添加罗丹明B，有哪些危害？2.食品添加剂的主要依据和来源？
在市场上一些不法商贩将非法添加剂加于调味品辣椒酱中，从中牟取利益。我国各地食品监督管理部门曾多次对非法添加剂进行专项检查。其中，辣椒酱中罗丹明B是重点监控项目。
罗丹明B，别名玫瑰红B，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料，主要用于造纸、制漆、纺织、皮革和瓷器的工业染色。由于其具有潜在的致癌和致突变性，现已不允许用作食品添加剂及食品染色。一些不法商贩为降低成本，获取高额利润，将其用于食品和调味品染色，严重损害人民身体健康。
1.原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中罗丹明B经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，罗丹明B与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中罗丹明B进行定性判定。
2.试剂
①提取试剂：将正己烷与丙酮按照体积比80：20混勻。
②复溶液：称取35.61 g磷酸氢二钠置于1000 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2 mol/L溶液A；称取31.21 g磷酸二氢钠置于1000 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2 mol/L溶液B。将溶液A与溶液B按照体积比67：33混勻，制成pH 7.1磷酸盐缓冲液。
③罗丹明B标准储备液（1 mg/mL）：精密称取适量罗丹明B参考物质，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻，制成浓度为1 mg/mL的罗丹明B标准储备液。冷藏，有效期6个月。
④罗丹明B标准中间液A（1 μg/mL）：精密量取罗丹明B标准储备液（1mg/mL）0.1 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，制成1 μg/mL的罗丹明B标准中间液A。临用新制。
⑤罗丹明B标准中间液B（100ng//mL）：精密量取罗丹明B中间液A（1 μg/mL）1 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，制成100ng/mL的罗丹明B标准中间液B。临用新制。
3.仪器及材料
①固相萃取柱：中性氧化铝柱，1000 mg/6 mL。
②移液器：200 μL、1 mL和5 mL。
③涡旋混合器。
④离心机：转速≥4000 r/min。
⑤电子天平：感量为0.01 g
⑥振荡器。
4.检测方法
（1）样品的测定
取具有代表性样品约500 g，充分粉碎混勻，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。
准确称取试样2 g（精确至0.01 g）置于50 mL具塞离心管中，依次加人20 mL提取剂，振荡提取3 min，以5000 r/min离心5 min。上清液待净化。吸取5 mL提取剂于固相萃取小柱中，流出液弃去。将上清液全部转移至固相萃取小柱中，流出液弃去。再加人20 mL提取剂淋洗固相萃取小柱，流出液弃去。用5 mL甲醇洗脱小柱，收集洗脱液吹干。精密加人500 μL复溶液，祸旋混合1 min，作为待测液。
吸取全部样品待测液于金标微孔中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育5 min；温育结束后，将金标微孔中溶液滴加到检测卡上的加样孔中，室温温育5～8 min，进行结果判定。
（2）结果判定
通过对比质控线和检测线的颜色深浅进行结果判定。由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。目视结果判读依据如图9-4所示。
图9-4 目视判定本意图
5.注意事项
环境条件：温度：15～25℃，湿度≤60%。
目标检测
一、单选题
1.食醋中游离矿酸的快速检测下限为（）%。
A.0.20(www.xing528.com)
B.0.30
C.0.40
D.0.50
2.国家标准GB 18186-2000规定，高盐稀态发酵酱油（含固稀发酵酱油）的氨基酸态氮每100 mL酱油中的特级酱油的含量为（）。
A.0.8
B.0.7
C.0.55
D.0.4
3.吗啡、可待因的胶体金检测卡结果判读时，（）可以判定为阳性。
A.质控线（C线）不显色
B.质控线（C线）显色，检测线（T线）比质控线（C线）颜色深
C.检测线（T线）颜色比质控线（C线）颜色相当
D.质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色或非常浅色。
二、填空题
1.目前，食醋中游离矿酸的检测主要依照国家标准中的___________和____________测试方法。
2.罗丹明B检测限为___________μg/kg。
3.配置酱油（SB 10336-2000）每100 mL氨基酸含量应≥___________g。
4.火锅底料中吗啡、可待因的快速检测方法为___________。
5.辣椒粉中苏丹红的快速检测假阳性率应≤___________%。
三、简答题
1.酱油中氨基酸态氮的快速检测的原理。
2.测定火锅底料中吗啡、可待因的胶体金免疫层析法的原理。
答案及解析
一、单选题
1.D 2.A 3.D
二、填空题
1.百里草酚蓝试纸法、甲基紫试纸法
2.5
3.0.4
4.胶体金免疫快速检测方法
5.15
三、简答题
1.答：在pH为4.8的乙酸钠—乙酸缓冲液中，氨基酸态氮与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3，5-二乙酸-2，6-二甲基-1，4二氢化吡啶氨基酸衍生物。在波长400 nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。
2.答：本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的吗啡、可待因经水提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测线（T线）上抗原的结合，导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中吗啡、可待因进行定性判定。
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