甲醛快速检测技术-食品快速检测技术

案例导入

案例：菏泽市食品药品监督管理局2015年4月对市场上的鱿鱼随机抽样检测。在抽检的63例鱿鱼样品中，有两例干鱿鱼快速检测呈阳性，实验室检测确认甲醛阳性，为不合格食品。

讨论：甲醛浸泡的水产品有什么危害？如何辨别“甲醛水产品”？

甲醛为无色气体，有刺激性气味。易溶于水和乙醚，水溶液浓度最高可达55%。2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，将甲醛放在一类致癌物列表中。甲醛的急性中毒表现为对皮肤、黏膜的刺激作用。吸入高浓度甲醛可导致呼吸道激惹症状，打喷嚏、咳嗽并伴鼻和喉咙的烧灼感；此外，还可诱发支气管哮喘、肺炎、肺水肿。经消化道一次性大量摄入甲醛可引起消化道及全身中毒性症状，口腔、咽喉和消化道的腐蚀性烧伤，腹痛，抽搐，死亡等。皮肤接触甲醛可引起过敏性皮炎、色斑、皮肤坏死等病变。经口摄入10～20 mL甲醛溶液可致死。

一、HMT法（比色卡法）

1.范围

本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。

2.原理

试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4，3-b]-S-四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量呈正相关，通过色阶卡进行目视比色，对试样中甲醛进行定性判定。

3.试剂及材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2016规定的二级水。

（1）试剂和配制

氢氧化钾、盐酸、亚铁氰化钾、乙酸锌、冰乙酸、乙二胺四乙酸二钠、高碘酸钾、4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT）、甲醛标准品溶液（100 μg/mL）。

氧化钾溶液（5 mol/L）：称取280.5 g氢氧化钾，用水溶解并定容至1000 mL，混匀。

氢氧化钾溶液（0.2 mol/L）：称取11.22 g氢氧化钾，用水溶解并定容至1000 mL，混勻。

盐酸溶液（0.5 mol/L）：量取41 mL盐酸，用水稀释并定容至1000 mL，混勻。

亚铁氰化钾溶液（106 g/L）：称取10.6 g亚铁氰化钾，用水溶解并定容至100 mL，混勻。

乙酸锌溶液（220 g/L）：称取22 g乙酸锌，加入3 mL冰乙酸溶解，用水稀释并定容至100 mL，混勻。

乙二胺四乙酸二钠溶液（100 g/L）：称取10 g乙二胺四乙酸二钠，用5 mol/L氢氧化钾溶液溶解，并定容至100 mL，混勻。

AHMT溶液（5 g/L）：称取0.5 g 4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT），用0.5 mol/L盐酸溶液溶解，并定容至100 mL，混勻后置于棕色瓶中，有效期6个月。

高碘酸钾溶液（15 g/L）：称取1.5 g高碘酸钾，用0.2 mol/L氢氧化钾溶液溶解，并定容至100 mL，混勻。

（2）参考物质

甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、分子量见表8-1。

表8-1　甲醛参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、分子量

（3）标准溶液配制

甲醛标准工作液（10 μg/mL）：精密量取甲醛标准品溶液（100 μg/mL）1 mL，置于10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇勻，制成浓度为10 μg/mL的甲醛标准工作液，临用新制。

（4）材料

甲醛快速检测试剂盒（AHMT法一比色卡法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

滤纸：中速定性滤纸。

4.主要仪器

移液器：200 μL、1 mL、5 mL，涡旋混合器，电子天平或手持式天平：感量为0.01 g，离心机：转速≥4000 r/min。环境条件：温度15～35℃，湿度≤80%。

5.实验方法

（1）试样制备

取适量有代表性试样的可食部分或浸泡液，固体试样剪碎混勻，液体试样需充分混勻。

（2）试样的提取

准确称取试样1 g（精确至0.01 g）或吸取试样1.0 mL，置于15 mL离心管中，加水定容至10 mL，祸旋提取1 min，静置5 min，取上清液作为提取液（如上清液浑浊，加入1 mL亚铁氰化钾溶液和1 mL乙酸锌溶液，涡旋混匀，4000 r/min离心5 min或滤纸过滤，取上清液或滤液作为提取液）。

（3）测定步骤

准确移取提取液2 mL于5 mL离心管中，加入0.4 mL乙二胺四乙酸二钠溶液和0.4 mL AHMT溶液，涡旋混勻后静置10 min，再加入0.1 mL高碘酸钾溶液，涡旋混勻后静置5 min，立即与标准色阶卡目视比色，10 min内判读结果。进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。

（4）质控试验

每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。

①空白试验。

称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，按照实验方法与试样同法操作。

②加标质控试验。

准确称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，置于15 mL离心管中，加入0.5 mL甲醛标准工作液（10 μg/mL），使试样中甲醛含量为5 mg/kg，按照实验方法与试样同法操作。

6.结果判定要求

观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读试样中甲醛的含量。颜色浅于检出限（5 mg/kg）则为阴性试样；颜色接近或深于5 mg/kg则为阳性试样。色阶卡见图8-1。

图8-1　甲醛标准色阶卡

质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控试验测定结果应与比色卡第二点（5 mg/kg或5 mg/L）颜色一致。

7.结论

由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。

8.性能指标

①检测限：5 mg/kg或5mg/L。

②灵敏度：灵敏度应≥95%。

③特异性：特异性应≥85%。

④假阴性率：假阴性率应≤5%。

⑤假阳性率：假阳性率应≤15%。

二、AHMT法（分光光度法）

1.范围

本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。

2.原理

试样中的甲醛经提取后，在碱性条件下与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，4-三氮杂茂（AHMT）发生缩合，再被高碘酸钾氧化成6-巯基-S-三氮杂茂[4，3-0]-S-四氮杂苯的紫红色络合物，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量呈正相关，用分光光度计在550 nm处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。

3.试剂及材料

（1）试剂

同HMT法（比色卡法）。

（2）参考物质

同HMT法（比色卡法）。

（3）标准溶液的配制

同HMT法（比色卡法）。

（4）材料

甲醛快速检测试剂盒（AHMT法一分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

滤纸：中速定性滤纸。

4.主要仪器

移液器：200 μL、1 mL、5 mL，涡旋混合器，电子天平或手持式天平：感量为0.01 g，离心机：转速≥4000 r/min，分光光度计或相应商品化测定仪，环境条件：温度15～35℃，湿度≤80%。

5.实验方法

（1）试样制备

同HMT法（比色卡法）。

（2）试样的提

同HMT法（比色卡法）。

（3）测定步骤

准确移取提取液2 mL置于5 mL离心管中，另准确吸取10 μg/mL的甲醛标准工作液0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、l.0 mL（相当于0μg、lμg、2μg、4μg、6μg、8μg、10μg甲醛）分别置于5 mL带刻度的具塞刻度试管中，加水定容至2 mL，涡旋混勻。于标准管和试样管中分别加入0.4 mL乙二胺四乙酸二钠溶液和0.4 mL AHMT溶液，涡旋混勻静置10 min，再加入0.1 mL高碘酸钾溶液，静置5 min.后用1 c m比色杯，以零管调节零点，于波长550n m处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。(www.xing528.com)

（4）质控试验

每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。

①空白试验。

称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，按照实验方法与试样同法作。

②加标质控试验。

准确称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，置于15 mL离心管中，加入0.5 mL甲醛标准工作液（10 μg/mL），使试样中甲醛含量为5 mg/kg，按照实验方法与试样同法操作。

6.分析结果的表述

（1）结果计算

试样中甲醛的含量按式（8-1）计算：

式中：X—试样中甲醛的含量，单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）；

P——由标准曲线得到的试样提取液中甲醛的含量，单位为微克（μg）；

P0——由标准曲线得到的空白提取液中甲醛的含量，单位为微克（μg）；

V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；

V1——测定用试样体积，单位为毫升（mL）；

m——试样的取样量，单位为克或毫升（g或mL）；

1000—单位换算系数。

计算结果保留两位有效数字。

（2）结果判定

当测定结果≥5 mg/kg或5 mg/L时，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检测2次以上。

（3）质量控制要求

空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果回收率≥60%。

7.结论

当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。

8.性能指标

①检测限：5 mg/kg或5 mg/L。

②灵敏度：灵敏度应≥95%。

③特异性：特异性应≥85%。

④假阴性率：假阴性率应≤5%。

⑤假阳性率：假阳性率≤15%。

三、乙酰丙酮法（分光光度法）

1.范围

本方法规定了水发产品及其浸泡液中甲醛的快速检测方法。本方法适用于银鱼、鱿鱼、牛肚、竹笋等水发产品及其浸泡液中甲醛的快速测定。

2.原理

试样中的甲醛经提取后，在沸水浴条件下与乙酰丙酮发生反应，生成黄色物质，其颜色的深浅在一定范围内与甲醛含量呈正相关，用分光光度计在413n m处测定吸光度值，与标准系列比较定量，得到试样中甲醛的含量。

3.试剂及材料

除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2016规定的二级水。

（1）试剂

无水乙酸钠（CH3COONa）、乙酰丙酮（C5H8O2）、乙酰丙酮溶液：称取25.0 g无水乙酸钠溶于适量水中，移入100 mL容量瓶中，加0.40 mL乙酰丙酮和3.0 mL冰乙酸，加水定容至刻度，混勻，移至棕色试剂瓶中，2～8℃保存，有效期1个月。

（2）参考物质

同AHMT法（分光光度法）。

（3）标准溶液配制

同AHMT法（分光光度法）。

（4）材料

甲醛快速检测试剂盒（乙酰丙酮法一分光光度法）：适用基质为水发产品及其浸泡液，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

滤纸：中速定性滤纸。

4.仪器及设备

移液器：200 μL、1 mL、5 mL，涡旋混合器，电子天平或手持式天平：感量为0.01 g，离心机：转速≥4000r/min，水浴锅，分光光度计或相应商品化测定仪，环境条件：温度15～35℃，湿度≤80%。

5.实验方法

（1）试样制备

同AHMT法（分光光度法）。

（2）试样的提取

同AHMT法（分光光度法）。

（3）测定步骤

准确移取提取液2 mL置于5 mL离心管中，另准确吸取10 μg/mL的甲醛标准工作液0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL（相当于0μg、1μg、2μg、4μg、6μg、8μg、10μg甲醛）分别置于5 mL带刻度的具塞试管中，加水定容至2 mL，涡旋混勻。于标准管和试样管中分别加入0.2 mL乙酰丙酮溶液涡旋混勻后沸水浴5 min，取出冷却至室温后用1 c m比色杯，以零管调节零点，于波长413 nm处测定吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。

（4）质控试验

每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。

①空白试验。

称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，按照实验方法与试样同法作。

②加标质控试验。

准确称取空白试样1 g（精确至0.01 g）或吸取空白试样1.0 mL，置于15 mL离心管中，加入0.5 mL甲醛标准工作液（10 μg/mL），使试样中甲醛含量为5 mg/kg，按照实验方法与试样同法操作。

6.分析结果的表述

（1）结果计算

同AHMT法（分光光度法）。

（2）结果判定

同AHMT法（分光光度法）。

（3）质量控制要求

同AHMT法（分光光度法）。

7.结论

当测定结果为阳性时，应对结果进行确证。

8.性能指标

①检测限：5 mg/kg或5 mg/L。

②灵敏度：灵敏度应≥95%。

③特异性：特异性应≥85%。

④假阴性率：假阴性率应≤5%。

⑤假阳性率：假阳性率≤15%。

9.其他

本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。

本方法参比标准为SC/T 3025-2006《水产品中甲醛的测定》或其他现行有效的甲醛检测标准。