案例导入
案例：人畜摄入了被呕吐毒素污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳和反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。此外，呕吐毒素还具有很强的细胞毒性和胚胎毒性，被联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）确定为最危险的自然发生食品污染物之一。1998年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为三类致癌物。呕吐毒素在谷物中最易出现，当谷物水分含量为22%时，在很短时间内，谷物即产生大量呕吐毒素。那么什么是呕吐毒素？呕吐毒素究竟有什么危害？如何采用快速检测方法检测呕吐毒素呢？
呕吐毒素，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇，因其引起猪呕吐而得名，国际上普遍将其定义为致癌物。呕吐毒素对人和动物毒性较强，不仅能引起呕吐腹泻，甚至还可以造成人畜流产等，小麦中呕吐毒素产生最重要的原因就是小麦赤霉素，小麦赤霉病是产生呕吐毒素的“罪魁祸首”。对于种植户来说，在小麦种植过程中，一定要注重赤霉病的防治，这才是避免“呕吐毒素”超标的根本。
1.范围
本方法规定了食品中呕吐毒素的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速测定。
2.原理
样品中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体与检测卡中检测线（T线）上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中呕吐毒素进行定性判定。
3.试剂
①提取液：水或胶体金免疫层析检测卡专用提取液。
②甲醇。
③呕吐毒素参考物质的中文名称：脱氧雪腐镰刀菌烯醇；CAS登录号51481-10-8；分子量296.32。
④标准溶液配制：准确称取适量呕吐毒素参考物质（精确至0.0001 g），用甲醇溶解，配成0.10 mg/mL的标准储备液，-20℃保存，有效期3个月。
⑤呕吐毒素胶体金免疫层析检测卡。
⑥中速定性滤纸。
⑦滤膜：0.45μm水相滤膜。
4.仪器及设备
天平、粉碎机、0.：9 mm样品筛、漩涡混合器、移液器（100 μL、200 μL、1.0 mL）、恒温装置（37.0℃±2.0℃）。
5.分析步骤
（1）试样制备
样品粉碎：将待测样品粉碎，过0.9mm样品筛，充分混合均勻，备用。
（2）试样提取
准确称取粉碎混勻样品5.0 g于离心管中，加入25.0 mL水或专用提取液，漩涡混合器提取5 min，静置1 min，中速定性滤纸过滤，滤液用0.45μm水相滤膜过滤，将滤液稀释至检测卡检测范围内，混勻，即得待测液。
（3）测定步骤
吸取150 μL上述待测液加入检测卡中，恒温装置内反应6 min.后进行结果判定。
（4）质控实验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
①空白试验。
称取空白试样，按照与样品同法操作。
②加标质控试验。
准确称取空白试样5.0 g或适量（精确至0.01 g）置于离心管中，加入适量呕吐毒素标准溶液，使呕吐毒素浓度为1.0mg/kg，按照与样品同法操作。
6.结果判定
根据质控线（C线）和检测线（T线）颜色变化进行结果判定，采用目测法对结果进行判定，比色法和消线法判定原则如下：(www.xing528.com)
（1）比色法
①无效。
质控线（C线）不显色，无论检测卡（T线）是否显色，表示操作不正确或检测卡已失效。
②阳性结果。
质控线（C线）显色，检测线（T线）显色明显浅于质控线（C线），判为阳性。
③阴性结果。
质控线（C线）显色，检测线（T线）比质控线（C线）显色深或检测线（T线）与质控线（C线）显色基本一致，判为阴性。
比色法结果判定示意图如图2-2所示。
图2-2 比色法结果判定示意图
（2）消线法
①无效。
质控线（C线）不显色，无论检测卡（T线）是否显色，表示操作不正确或检测卡已失效。
②阳性结果。
质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色，判为阳性。
③阴性结果。
质控线（C线）显色，检测线（T线）显色，判为阴性。
消线法结果判定示意图如图2-3所示。
图2-3 消线法结果判定示意图
（3）质控样品要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7.结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。
8.性能指标
①检测限：呕吐毒素为1.0 mg/kg。
②判定限：呕吐毒素为0.9 mg/kg。
③假阴性率：假阴性率应≤5%。
④假阳性率：假阳性率应≤10%。
注：假阳性率和假阴性率计算方法参照《食品快速检测方法评价技术规范》（食药监办科〔2017〕43号）执行。
9.其他
本方法测定步骤和结果判读也可以根据厂家检测卡的说明书进行，但应符合或优于本方法规定的性能指标。
本方法参比方法为GB 5009.111-2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》。
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