【摘要】:当细胞色素C水溶液的浓度为5.0ng/μL,体积3mL,溶液pH为1时,采用400μL的离子液体萃取30min,细胞色素C的萃取率为85%。当细胞色素C的浓度为20ng/μL时,单次萃取率为33%,两次萃取率为63%。反萃取条件及结果。细胞色素C在生物体内的含量较低,因此,在实验中没有考察实际样品中的细胞色素C的提取。
本章在离子液体BtmsimPF6萃取血红蛋白的基础上,采用离子液体BtmsimPF6对细胞色素C的萃取进行了研究。
(1)萃取条件及结果。当细胞色素C水溶液的浓度为5.0ng/μL,体积3mL,溶液pH为1时,采用400μL的离子液体萃取30min,细胞色素C的萃取率为85%。
(2)萃取因素。在中性条件下,离子液体不能萃取细胞色素C,而在酸性条件下,细胞色素C可直接从水溶液中萃取到离子液体中;当离子液体体积增加到一定体积,萃取率不再增加,采用二次萃取方法可以提高萃取率。当细胞色素C的浓度为20ng/μL时,单次萃取率为33%,两次萃取率为63%。
(3)萃取机理。中性条件下,细胞色素C分子的疏水性基团包埋在肽链中,血红素基团中铁原子的第5、6个配位键被组氨酸咪唑基的氮原子和硫原子所占据;在酸性条件下,细胞色素C构型发生转变,疏水性基团暴露出来,促使细胞色素C被萃取到离子液体中;当溶液pH小于2时,细胞色素C中血红素基团的铁原子与甲硫氨酸的第6个配位键断裂,提供一个空的配位位置,与离子液体的咪唑阳离子发生配位作用,从而促使细胞色素C进入离子液体中。(www.xing528.com)
(4)反萃取条件及结果。20ng/μL的细胞色素C被400μL的离子液体萃取后,采用3mL的二次去离子水反萃取30min,反萃取率为33%。
(5)该方法的不足。细胞色素C在生物体内的含量较低,因此,在实验中没有考察实际样品中的细胞色素C的提取。
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