离子液体中细胞色素C的自然反萃取

从以上实验结果可以看出，在酸性条件下细胞色素C可从水溶液中萃取到离子液体BtmsimPF6中，但后续的检测和应用一般都是在水溶液中进行，因此须将细胞色素C从离子液体中反萃取到水溶液中。本实验对离子液体中细胞色素C的反萃取进行了研究。

实验研究发现，采用二次去离子水（pH=6.7）即可将离子液体中的部分细胞色素C反萃取到水溶液中（图5-4），其具体操作为：调节细胞色素C水溶液的pH为1.0，测得其吸光度为0.135，将细胞色素C溶液与400μL离子液体混合，按前述方法萃取，测定萃取后溶液的吸光度为0.090，取400μL萃取细胞色素C的离子液体与3mL二次去离子水（pH=6.7）混合，涡旋震荡30min后离心分离，测定反萃取后水溶液的吸光度为0.018（扣除基线），以萃取到离子液体中细胞色素C的量为基准，得到细胞色素C的反萃取率为33%。

图5-4　从离子液体中反萃取细胞色素C(www.xing528.com)

a—反萃取前溶液　b—反萃取后溶液　c—反萃取后溶液（扣除基线）
细胞色素C的浓度为20ng/μL，体积为3mL pH=1；离子液体体积为400μL；萃取时间30min；反萃取水溶液体积为3mL，pH=6.7；反萃取时间30min。

用pH为6.7的二次去离子水作为反萃取剂，无须加入任何辅助溶剂，即可将细胞色素C从离子液体中反萃取出来。其可能原因是在中性条件下细胞色素C的疏水性基团及血红素被包埋在肽链中，其表面疏水性基团减少，从而有利于细胞色素C的反萃取。但反萃取率低，这主要是由于在pH为1时离子液体咪唑阳离子与细胞色素C中的铁原子发生配位，在中性条件下其配位键断裂困难致使反萃取效率相对较低。