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离子液体对核酸和蛋白质分离的应用评估

时间:2023-11-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:实验中分别考察了pH对萃取前、后细胞色素C水溶液的吸收光谱的影响,结果如图5-1所示。其原因可能是细胞色素C随pH的变化而发生了相应的构型改变。当细胞色素C被离子液体萃取后,溶液的吸光度值随pH的降低而减少,表明水溶液的酸性增大,有利于细胞色素C的萃取。图5-1pH变化对萃取细胞色素C的影响细胞色素C的浓度为3mL,体积为20ng/μL;离子液体体积400μL;萃取时间30min。

离子液体对核酸和蛋白质分离的应用评估

第四章研究发现在无任何其他辅助萃取剂的条件下,血红蛋白可直接被萃取到离子液体中,但是对含有血红素基团的细胞色素C的萃取研究表明,在中性环境中离子液体不能直接将其萃取,而当溶液为酸性时,离子液体BtmsimPF6能够直接萃取细胞色素C。

实验中分别考察了pH对萃取前、后细胞色素C水溶液的吸收光谱的影响,结果如图5-1所示。pH在2~6.5范围内,萃取前细胞色素C的水溶液在最大吸收点处的吸光度随pH降低而明显增大;当pH小于2时,其相应的吸光度反而降低。其原因可能是细胞色素C随pH的变化而发生了相应的构型改变。在中性条件下,细胞色素C的疏水性氨基酸及血红素被包埋在细胞色素C的肽链中,pH降低后,肽链发生伸展使包埋在蛋白质肽链中的疏水性基团及血红素外露[16],因此吸光度增大。当溶液的pH小于2时,细胞色素C氨基酸中的咪唑原子与血红素中铁原子的配位键断裂[17],造成吸光度反而降低。当细胞色素C被离子液体萃取后,溶液的吸光度值随pH的降低而减少,表明水溶液的酸性增大,有利于细胞色素C的萃取。因此,本实验中采用的萃取条件为pH=1。

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图5-1 pH变化对萃取细胞色素C的影响

细胞色素C的浓度为3mL,体积为20ng/μL;离子液体体积400μL;萃取时间30min。

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