反萃取条件研究：SDS浓度与血红蛋白反萃取率的关系

从以上实验可以看出，离子液体BtmsimPF6可以定量地从水溶液中将血红蛋白萃取到离子液体中，但是在后续的检测和应用过程中，离子液体中的蛋白质不能够直接地被应用，而必须将其从离子液体中反萃取到水溶液中。因此，本实验对离子液体中血红蛋白的反萃取进行了研究。

考察了不同酸度介质及使用不同盐类的反萃取情况，结果表明，不管是在酸性还是碱性介质下，血红蛋白都不能从离子液体相中反萃取到水溶液中；对采用不同种类的盐（NaCl、硝酸铵、柠檬酸、磷酸氢二钾等）作为反萃取溶剂的萃取研究表明，血红蛋白也不能被反萃取；对几种表面活性剂作为反萃取剂的反萃取研究表明，在有十二烷基磺酸钠（SDS）存在时，血红蛋白能被从离子液体中反萃取出来。实验中对采用SDS作为反萃取剂的反萃取条件进行了研究。

将萃取血红蛋白后的离子液体与不同浓度的SDS水溶液混合，在振荡器上剧烈振荡30min后，离心分层，测定上层水相的吸光度，以406nm的吸光度计算血红蛋白的反萃取率，其结果如图4-6所示。由图中可以看出，随着反萃取溶液中SDS浓度的增大，血红蛋白的反萃取率也明显增大，当SDS浓度大于0.08g/mL时，反萃取率大于85%，表明离子液体中大部分血红蛋白可以被反萃取到水溶液中。然而，随着SDS浓度的增大，在实验过程中，两相黏稠度增大，很难将水相与离子液体相分离，同时，考虑到后续应用时SDS的浓度不宜过大，因此，本实验中选择的反萃取水溶液中SDS浓度为0.06g/mL。

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图4-6　SDS浓度对离子液体中血红蛋白反萃取率的影响

血红蛋白浓度为20ng/μL，体积为3mL；IL体积为400μL；萃取时间和反萃取时间为30min。