【摘要】:固相萃取是较为常用的萃取分离及纯化方法,即在适当条件下使生物大分子通过氢键或静电等相互作用力吸附在固相萃取剂的表面,从而达到与样品基体组分及其他杂质分离的目的,然后采用适宜的洗脱剂将吸附在固相表面的生物样品洗脱下来。目前常用的固相吸附剂有硅胶、分子筛、树脂等。
固相萃取是较为常用的萃取分离及纯化方法,即在适当条件下使生物大分子(DNA、蛋白质)通过氢键或静电等相互作用力吸附在固相萃取剂的表面,从而达到与样品基体组分及其他杂质分离的目的,然后采用适宜的洗脱剂将吸附在固相表面的生物样品洗脱下来。这个过程除了可以实现分离纯化,还可达到适度富集的目的。目前常用的固相吸附剂有硅胶、分子筛、树脂等。以硅胶作为吸附材料对不同生物样品中的DNA的萃取分离研究已相当广泛[64-66]。Delefosse等[67]采用King-Fisher技术,以顺磁性的硅石作为固相吸附材料,使硅石与DNA结合,从而实现对DNA的萃取分离,该方法不仅可以去除样品中的PCR扩增抑制物质,而且操作步骤简单。West等[68]采用具有Chaotropic Salt的硅石作为固相吸附剂,在流动系统中进行萃取分离操作,在高速运转的条件下仍然能保持DNA的吸附效率。Vignoli等[69]采用螯合树脂Chelex-100作为吸附材料,对血液样品中的HIV-1 DNA进行了分离萃取,与经典的蛋白酶K降解方法相比,该方法能够获得较高的DNA回收率,同时还能减少污染,更适用于PCR扩增。聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)中的氨基可以与DNA链上带负电性的磷酸根通过静电作用缔合成复合物,用聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)修饰PEI形成PEG-PEI共聚物作为固相萃取剂,可以实现对质粒DNA的萃取,而且分离出的DNA中不含有RNA,只有少量的蛋白质[70]。(www.xing528.com)
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