Wnt经典信号与结核分枝杆菌感染下的免疫调控成果

目前关于凋亡的分类根据是否有caspase 的参与分为caspase 依赖性和caspase 非依赖性凋亡途径，那么为了检验Wnt 经典信号诱导的凋亡是否依赖于caspase 途径，需要通过Z-VAD 来验证。Z-VAD 是一种可透过细胞膜的广泛的caspase 抑制剂，它处理细胞后，可抑制细胞中的大部分的caspase活性。

从我们的研究结果可以看出，Z-VAD 没有降低细胞存活率，表明其没有细胞毒性，而Wnt3a、BCG 及二者共同作用细胞的存活率低于对照。Z-VAD提高了Wnt3a 和Wnt3a+BCG 细胞的存活率，这表明当Z-VAD 抑制了caspase 活性后凋亡就会被阻断，因此存活率上升。但Z-VAD 对BCG 感染后的细胞存活没有明显提高，这可能是BCG 感染后的细胞不仅存在凋亡更多的可能是坏死，所以Z-VAD 并不能逆转BCG 感染后细胞死亡的现象。研究小组进一步实验验证发现，Z-VAD 对Wnt 经典信号及BCG 感染后的巨噬细胞的凋亡具有一定幅度的下调作用。这表明Wnt 经典信号对结核分枝杆菌感染后的细胞凋亡的诱导是依赖于Caspase 途径。Z-VAD 能抑制Wnt 经典信号诱导的细胞凋亡，那么，它对caspase-3 活性又有怎样的影响？通过检测caspase-3 活性及其蛋白表达，结果显示，Wnt3a 能上调BCG 感染和未感染的巨噬细胞的caspase-3 的蛋白水平及其活性，而Z-VAD 下调了这两种处理细胞的caspase-3 的蛋白水平及其活性。同时Z-VAD 对BCG 感染后巨噬细胞的caspase-3 的蛋白水平及其活性也有下调作用。

图5-6　不同处理后巨噬细胞Tunel 染色结果图（ 200×）(www.xing528.com)

（ A.Control B.Wnt3a C.BCG D.Wnt3a+BCG 1.荧光和普通光.2 荧光）

由此可以看出，既然Z-VAD 能提高Wnt 经典信号激活后的细胞存活率，降低该信号诱导的细胞凋亡率和caspase-3 的蛋白表达水平及caspase-3的活性。那么，可以证实激活Wnt 经典信号后诱导的细胞凋亡主要依赖于caspase 途径。而对于BCG 感染后细胞凋亡的途径而言，不仅有caspase 途径参与可能还有其他途径参与BCG 感染后的细胞死亡。