TNF-a 作为一种重要的促炎因子，通过结合膜表面受体发挥其生物学功能，而只有结合死亡结构域的TNFRI 的TNF-a 才能诱导细胞死亡，依据具体处理条件和细胞对象的不同，TNF-α 能诱导不同类型的死亡：凋亡或坏死。被结核分枝杆菌感染后，凋亡作为结核分枝杆菌感染后巨噬细胞死亡的方式之一，它的命运在一定程度上决定着结核分枝杆菌的命运。既然Wnt3a对BCG 感染后巨噬细胞的TNF-α 的分泌量具有抑制作用，那激活Wnt /βcatenin 信号通路对巨噬细胞的死亡影响是怎样的。通过Wnt3a 和DKK1 分别激活和阻断Wnt /β-catenin 信号通路，并用BCG 感染后通过MTT 法测定细胞存活率，如图5-2A 所示，Wnt3a 处理存活率为68.5%，BCG 处理存活率为58.4%而Wnt3a+BCG 处理存活率为65.1%，各处理巨噬细胞存活率均低于对照，这表明Wnt3a 和BCG 处理都能促进细胞死亡。那么这种死亡到底是不是凋亡呢？
AnnexinV-FITC / PI 双荧光染色法可以更好地鉴别细胞坏死和凋亡，AV 能透过完整细胞膜，嵌入细胞DNA 中，使之发出亮绿色荧光；而PI 只能透过受损细胞后使核DNA 着色，发橘红色荧光，由此区分早期、晚期凋亡和坏死细胞。如图5-2B 所示，在双变量流式细胞仪检测结果的散点图中可见细胞分落在4 个象限：左下（LL）象限、右下（LR）象限、右上（UR）象限和左上（UL）象限，分别代表活细胞、早期凋亡细胞、早晚期凋亡细胞和坏死细胞。由图5-2B 可知，各处理细胞的凋亡率均高于对照，其中Wnt3a 处理促进了BCG 感染后细胞的凋亡率。由此可见，激活Wnt /β-catenin 信号通路能诱导被结核分枝杆菌感染后的巨噬细胞凋亡。
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图5-2 激活Wnt 经典信号提高了BCG 感染后巨噬细胞的凋亡率
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