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CNT处理对线粒体电子传递链复合物V活性的影响

时间:2023-11-16 理论教育 版权反馈
【摘要】:反应1 min时,对照样品的线粒体电子传递链复合物V活性为0.100 7 U/mg,CNT处理的线粒体其复合物V活性为0.008 3 U/mg;当反应至5 min时,对照样品的复合物V活性为降至0.008 3 U/mg,CNT处理样品活性则为0.003 3 U/mg,结果表明CNT处理降低了线粒体电子传递链复合物V的活性。

CNT处理对线粒体电子传递链复合物V活性的影响

线粒体电子传递链复合物V,通常称为ATP合成酶(ATP synthase)、F型ATP酶(F type ATPase)和F1F0 ATP酶(F1F0 ATPase),是线粒体氧化磷酸化的终极反应。其分子量为500 KD,含有16个亚单位,其中两个ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有两个结构域:F0为质子通道,由几个膜蛋白构成,包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP(oligomycin sensitive conferring protein)等;F1催化活性结构域,由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于产生大部分细胞所需的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时,呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质,激活F1催化活性结构域,促使ATP合成。基于ATP,在寡霉素参与下,受到F1F0 ATP酶的水解,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺嘌呤核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),产生的吸光峰值的变化(340 nm),来定量分析F1F0 ATP酶活性。

由于通常反应1 min后比色测定值趋于稳定,测定值由高到低变化,测定可以持续5 min。因此,分别对1 min和5 min的吸光度值进行了分析,发现对照和CNT处理样品的1 min和5 min测定值均低于0 min测定读数,表明有复合物V活性。线粒体电子传递链复合物V酶活性单位浓度定义:在30℃温度下,p H 7.5条件下,每分钟内能够氧化1微摩尔还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作为一个活性单位。反应1 min时,对照样品的线粒体电子传递链复合物V活性为0.100 7 U/mg,CNT处理的线粒体其复合物V活性为0.008 3 U/mg;当反应至5 min时,对照样品的复合物V活性为降至0.008 3 U/mg,CNT处理样品活性则为0.003 3 U/mg,结果表明CNT处理降低了线粒体电子传递链复合物V的活性。(www.xing528.com)

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