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CNT处理的线粒体复合物II活性分析

时间:2023-11-16 理论教育 版权反馈
【摘要】:反应1 min时,对照样品的线粒体电子传递链复合物II活性为0.006 8 U/mg,CNT处理的线粒体其复合物II活性为0.003 6 U/mg;当反应至5 min时,对照样品的复合物II活性为降至0.002 4 U/mg,CNT处理样品活性则为1.032 15E-18 U/mg,结果表明CNT处理降低了线粒体电子传递链复合物II的活性。

CNT处理的线粒体复合物II活性分析

线粒体电子传递链复合物II,通常称为琥珀酸-辅酶Q还原酶或琥珀酸脱氢酶(succinate-coenzyme Q Reductase;succinate dehydrogenase),是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体:含有四个亚单位,包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤核苷酸(flavin adenine dinucleotide;FAD)和三个铁硫中心(Fe-S clusters),以及细胞色素b亚单位,其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸-辅酶Q还原酶。复合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化为富马酸(fumarate),线粒体内电子由供体FAD传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,进行呼吸链传递。基于琥珀酸底物,通过琥珀酸-辅酶Q还原酶的催化,氧化为富马酸,同时氧化型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIP)转化为还原型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIPH2),在分光光度仪下产生吸光峰值的变化(600 nm波长),由此定量测定琥珀酸-辅酶Q还原酶的特异活性。

由于通常反应1 min后比色测定值趋于稳定,测定值由高到低变化,测定可以持续5 min。因此,分别对1 min和5 min的吸光度值进行了分析,发现对照和CNT处理样品的1 min和5 min测定值均低于0 min测定读数,表明有复合物II活性。线粒体电子传递链复合物II(琥珀酸-辅酶Q还原酶)单位活性定义为:在30℃,p H 7.5条件下,每分钟内能够还原1微摩尔合成辅酶Q同功类似物二氯酚靛酚(DCPIP)所需的酶量作为一个活性单位。反应1 min时,对照样品的线粒体电子传递链复合物II活性为0.006 8 U/mg,CNT处理的线粒体其复合物II活性为0.003 6 U/mg;当反应至5 min时,对照样品的复合物II活性为降至0.002 4 U/mg,CNT处理样品活性则为1.032 15E-18 U/mg,结果表明CNT处理降低了线粒体电子传递链复合物II的活性。(www.xing528.com)

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