百子莲离体细胞超低温保存技术研究成果

1.9.1.1　百子莲EC超低温保存过程中碳纳米管低温保护剂的热物性分析

利用差示扫描量热仪和低温显微镜系统观测CNT-PVS2（Treated）与PVS2（CK）在快速冷冻与解冻过程中的结晶温度区间、结晶形状、冰晶生长速率、玻璃化与反玻璃化转变温度等热力学指标。揭示单壁碳纳米管对PVS2理化性质的影响范围，阐明单壁碳纳米管是否改善低温保护剂的热物理性质而间接提高了百子莲EC超低温保存的细胞活性。

1.9.1.2　超低温保存过程中碳纳米管在百子莲EC细胞中的定位分析

在CNT-PVS2超低温保存体系的CNT-PVS2脱水、快速解冻及洗涤中，采用拉曼光谱仪对单壁碳纳米管是否进入百子莲EC胞内进行定性分析；应用透射电镜观察单壁碳纳米管在百子莲EC胞内外的亚细胞定位情况。明确超低温保存过程中单壁碳纳米管在细胞内外的分布规律，为后续的生理学检测与分子层面响应机制分析在结构学层面提供可靠依据。

1.9.1.3　碳纳米管对超低温保存过程中百子莲EC抗氧化系统的影响

对比百子莲EC在CNT-PVS2超低温保存体系与常规体系中相对电导率和丙二醛含量的动态变化规律，测定ROS重要组分H 2 O2含量、抗氧化酶（CAT、SOD和POD）活性和非酶促抗氧化剂（AsA和GSH）含量的变化，结合ROS信号转导通路及清除网络相关基因的定量分析，揭示超低温保存过程中单壁碳纳米管对百子莲EC抗氧化系统的调控作用。

1.9.1.4　碳纳米管对超低温保存体系中百子莲EC线粒体电子传递链的调控作用(www.xing528.com)

对比百子莲EC在CNT-PVS2超低温保存体系与常规体系中ROS主要来源细胞器——线粒体的电子传递链复合物I～V的活性，结合线粒体电子传递链相关基因的定量分析，揭示超低温保存过程中单壁碳纳米管对百子莲EC线粒体电子传递的调控作用。

1.9.1.5　碳纳米管对超低温保存体系中百子莲EC细胞程序性死亡的调控作用

ROS是细胞程序性死亡的开关，对比百子莲EC在CNT-PVS2超低温保存体系与常规体系中细胞程序性死亡标志物的信号差异，研究单壁碳纳米管在百子莲EC超低温保存过程中对细胞程序性死亡可能起到的调控作用。

1.9.1.6　碳纳米管对超低温保存体系中百子莲EC水通道蛋白的调控作用

基于单壁碳纳米管具有仿生水通道的特性，对百子莲已知水通道蛋白的基因表达水平进行定量分析，研究单壁碳纳米管在百子莲EC超低温保存过程中对于水分运输相关基因可能起到的调控作用。