应用微生物学：生理学时期

生理学时期前后不过几十年，但对微生物学发展起到了重要的作用。 这一时期的研究由表及里，揭示了微生物的生命活动规律，解决了许多生产上的难题，建立了一整套研究微生物学的方法，是微生物学发展史上的奠基时期。 在这个时期，对微生物学发展做出最大贡献的是法国人巴斯德（Louis Pasteur，1822—1895）和德国人柯赫（Robert Kobh，1843—1910）。

巴斯德对微生物学的贡献主要有以下几个方面:

①论证了酒和醋的酿造，以及一些物质的腐败是由一定种类的微生物引起的，彻底否定了长期争论不休的生命“自然发生论”。

②提出了发酵是微生物在没有空气的环境中的呼吸作用引起的，而酒的变质则是由于有害微生物生长的结果。

③进一步证明了不同微生物种类具有独特的代谢功能，各自需要不同的生活条件才能产生不同的作用。

④创造了防止酒变质的加热灭菌法，后来被称为“巴氏消毒法”，使用这一方法可使新生产的葡萄酒和啤酒长期保存。(www.xing528.com)

后期，巴斯德开始研究人、禽、畜的传染病（如狂犬病、炭疽病、鸡霍乱等），提出病原微生物是传染病因的正确理论，以及应用菌苗接种预防传染病的方法。 巴斯德在微生物学各方面的科学研究成果，促进了医学、发酵工业和农业的发展。 巴斯德对微生物生理学的研究为现代微生物学奠定了基础。

与巴斯德同时代的德国微生物学家柯赫，对新兴的医学微生物学做出了巨大贡献。 柯赫首先论证了炭疽杆菌是炭疽病的病原菌，接着又发现结核病和霍乱的病原细菌，并提倡采用消毒和杀菌方法防止这些疾病的传播。 他同时提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——柯赫法则。 由于柯赫在病原菌研究方面的开创性工作，使得19 世纪70 年代至20 世纪20 年代成为发现病原菌的黄金时代，这一时期所发现的各种病原微生物不下百种（其中包括植物病原菌）。 随后，他的学生陆续发现白喉、肺炎、破伤风、鼠疫等的病原细菌，引起了当时直至以后数十年间人们的高度重视。

柯赫除了在病原菌方面取得了丰硕成就外，他在微生物基本操作技术方面的贡献也为微生物学的发展奠定了技术基础。 他首创了细菌的染色方法和利用固体培养基分离纯化微生物的技术。 细菌着色法、分离纯化技术和配制培养基技术是进行微生物研究的基本方法和技术，一直沿用至今。 尤其后两项是微生物研究的重要技术，为当今动、植物细胞的培养做出了十分重要的贡献。

正是由于巴斯德和柯赫的杰出研究工作，使微生物学作为一门独立的学科开始形成。 在这期间，除他们两人对微生物生理学研究做出重大贡献外，其他的一些科学家也取得了很大的成绩。

1860 年，英国外科医生李斯特（J.Lister，1827—1912）从巴斯德的研究成果中得到启发，应用药物杀菌和煮沸手术用具，建立了无菌的外科手术操作方法。 1901 年，著名细菌学家和动物学家梅契尼科夫（Metchnikoff，1845—1916）发现了白细胞吞噬细菌的作用，为免疫学的发展做出了贡献。 俄国伟大的微生物学家维诺格拉德斯基（C. H. Winogradsky，1856—1953）于1887 年发现硫黄细菌，1890 年又发现硝化细菌，他论证了土壤中硫化作用和硝化作用的微生物学过程，以及这些细菌的化能营养特性。 维诺格拉德斯基最先发现嫌气性的自生固氮细菌，研究了土壤细菌各个生理类群的生命活动，揭示了土壤微生物参与土壤物质转化的作用，为土壤微生物学的发展奠定了基础。 1892 年，俄国植物生理学家伊万诺夫斯基（L. H. Ivanowsky）发现烟草花叶病原体是比细菌还小的、能通过细菌过滤器的、光学显微镜不能窥测的生物，称为过滤性病毒。 1897 年，德国学者布赫纳（E.Büchner）发现酵母菌的无细胞提取液与酵母一样都具有发酵糖液产生乙醇的作用，验证了酵母菌乙醇发酵的酶促过程，首次将微生物生命活动与酶的化学作用结合起来，开创了微生物生化探索的新时代。