常见霉菌检测与形态观察-环境工程微生物学实验

一、实验目的

（1）学习霉菌的检测技术。

（2）掌握霉菌的制片方法。

（3）观察霉菌形态及各种孢子形态。

二、实验原理

霉菌由许多交织在一起的菌丝体构成。在潮湿条件下，霉菌生长繁殖成圆形、丝状、绒毛状、絮状或蜘蛛网状的菌丝体，并在形态及功能上分化成多种特殊结构。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的有横隔膜分割为多细胞（如青霉、曲霉），有的没有横隔（如毛霉、根霉）。菌落较大，质地较疏松，颜色各异。菌丝体制片后可用低倍镜或高倍镜观察。观察菌丝直径大小、有无横隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖或有性繁殖时形成的孢子种类及着生方式。

因霉菌的菌丝体较粗大、孢子易飞散，若将菌丝体置于水中易变形，故观察时将霉菌置于乳酸石炭酸溶液中，以保持菌丝体原形，使之不易干燥，并有杀菌作用。

三、实验仪器及材料

实验所需仪器有高压蒸汽灭菌器、生化恒温培养箱、净化工作台、恒温水浴、显微镜、玻璃器皿、1 000 mL烧杯、500 mL三角瓶、试管等。

实验所需材料有牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、乳酸石炭酸、氢氧化钠、盐酸。

四、实验步骤

1.培养基的制备

肉浸液培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏20 g，氯化钠5 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.4～7.6。(www.xing528.com)

称取上述各成分混合加热，充分溶解，用质量分数为15%的氢氧化钠溶液和质量分数为10%的盐酸调节pH为7.4～7.6，置于高压蒸汽灭菌器120℃灭菌30 min，冷却，备用。

2.操作步骤

（1）选用菌种：黄曲霉、黑根霉、白地霉、紫红曲霉。

（2）将冷却后的培养基融化后，倒入平皿至皿高的1/2，凝固后，接种选用的菌种。

（3）将培养皿置于生化培养箱，恒温37℃，培养24 h。

（4）结果观察。观察长出青霉、黄曲霉、黑根霉平板中的菌落并描述其菌落特征。注意观察菌落的大小，菌丝高矮、生长密度、孢子颜色和菌落表面等状况，并与细菌、放线菌、酵母菌菌落比较。

（5）个体观察。取一小滴乳酸石炭酸溶液于干净的载玻片中央，用接种针从菌落边缘挑取少许菌丝体置于其中，将其摊平，轻轻从液滴一侧盖上盖片（注意勿出现气泡），置于低倍镜、高倍镜下观察。

紫红曲霉：观察菌丝体的分支状况，有无横隔。注意分生孢子梗及其分支方式、梗基、小梗及分生孢子的形状。

利用平板插片法，可观察到较为清晰的分生孢子穗，帚状分枝的层次状况及成串的分生孢子。平板接种后待菌落长出时斜插上灭菌盖片（角度为30°～45°）。盖片应插在菌落的稍前侧，经培养后盖片内侧可见到长有一薄层薄丝体。用镊子取下盖片，轻轻盖在滴有乳酸石炭酸溶液的载片上，即可观察。

黄曲霉：观察菌丝体有无横隔、足细胞，注意分生孢子梗、顶囊、小梗及分生孢子着生状况及形状。

黑根霉：观察无横隔菌丝（注意菌丝内常有气泡，不是横隔）、假根、葡萄枝、孢子囊柄、孢子囊及孢囊孢子。孢囊破裂后能观察到囊托及囊轴。