空气微生物检测成果：过滤法实验示例

一、实验目的

（1）通过实验掌握过滤法检测空气微生物技术。

（2）学习检测空气中细菌的基本方法。

二、实验原理

利用无菌液体过滤空气，将空气中的微生物截留在液体中。取此液体定量培养、计数，计算出空气中细菌或其他微生物的含量。

三、实验仪器和材料

实验所需仪器有高压蒸汽灭菌器、生化恒温培养箱、盛有200 mL无菌水的锥形瓶（500 mL）5个、盛有10 L水的塑料桶（15 L）5个、玻璃器皿。

实验所需材料有琼脂、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、氢氧化钠、盐酸。

四、实验步骤

1.培养基的制备

营养琼脂培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠3 g，琼脂15 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.4～7.6。称取上述各成分混合加热，充分溶解，用质量分数为10%的氢氧化钠溶液和质量分数为10%的盐酸调节pH为7.4～7.6，置于高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20 min，倒入平皿约占1/2高度，冷却，备用。

2.准备过滤装置

图2-3　过滤法测定空气微生物采样器(www.xing528.com)

按图2-3安装空气采样器。

3.采样点的选择及放置采样器

随机选择具有代表性的采样点。室内采样一般为五点梅花式（图2-1），室外采样可根据空气污染程度及地势变化进行。按图2-2所示，将5套空气采样器分别放在5个采样点上。

4.采样

打开塑料桶的水阀，使水缓慢流出，外界空气经喇叭口被吸入盛有无菌水的锥形瓶（采样器）中。10 L水流完后，10 L空气中的微生物被截留在200 mL无菌水中。

5.测过滤液中细菌数

将5个塑料桶的过滤液充分摇匀，分别吸取1 mL过滤液于无菌培养皿（设平行样3个）中，再将融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基倒入含菌液的培养皿中，摇匀，静置，凝固后置于37℃恒温箱培养48 h。

6.计算平均菌落数

按下式分别求出每套采样器的细菌数，再求5套采样器细菌数的平均值，即为所测环境空气微生物数。

五、思考题

测定空气微生物时，选择采样点应考虑哪些因素？