环境工程实验：撞击法检测空气细菌

一、实验目的

（1）通过实验掌握气流撞击法检测空气微生物技术。

（2）学习检测空气中细菌的基本方法。

二、实验原理

图2-2　缝隙采样器

以缝隙采样器（图2-2）为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝（狭缝宽有0.15 mm，0.33 mm和1 mm 3种）而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2 mm。平板以一定的转速（1 r/min、5～60 r/min、60 r/min）旋转。通常平板转动1周，取出置于37℃恒温箱中培养48 h，计数菌落数。根据空气中微生物的密度可调节平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时，平板转动的速度要比含菌最低的空气样品的转速快。根据取样时间和空气流量算出单位空气中的含菌量，以CFU/m3计。

三、实验仪器和试剂

实验所需仪器有高压蒸汽灭菌器、干热灭菌器、恒温培养箱、冰箱、量筒、三角烧瓶、pH计或精密pH试纸、撞击式微生物采样器。

实验所需试剂有蛋白胨、牛肉膏、琼脂、氯化钠、氢氧化钠、盐酸。

四、实验操作

1.培养基的配制(www.xing528.com)

用天平分别称量牛肉膏0.75 g、蛋白胨2.5 g、氯化钠1.25 g、琼脂2.5～5 g、蒸馏水250 mL（有时也可用自来水），依次加入烧杯中，混合后在电炉上加热，不断搅拌以免糊底，直至完全溶解。过滤去除沉淀，加水补足因加热蒸发的水量。用质量分数为10%的氢氧化钠溶液和质量分数为10%的盐酸调节pH为7.4～7.6；倒入三角烧瓶中。120℃灭菌15～30 min，待用。

2.实验步骤

（1）采样地点。随机选择具有代表性的采样点。室内采样一般为五点梅花式（图2-1），室外采样可根据空气污染程度及地势变化进行。

（2）将采样器消毒，并装营养琼脂培养基。通风机转速为4 000～5 000 r/min，使得空气微生物在培养基表面上均匀分布。每个采样点平行放2～3个平皿。

（3）室内培养。将盛有采集样品的平皿带回实验室，置于生化恒温培养箱内，恒温37℃，培养48 h。

（4）空气中细菌数量计算。可根据吸取的同量的空气测知细菌污染的程度。每分钟的气体流量可从仪器的微气压计测得。同时气体流量的大小可在仪器上进行调整。这样就可以在短时间内取得气体标本。用以下公式计算空气中的细菌数量，即

C=N/(Q×t)

式中，C为空气细菌菌落数，CFU/m3；N为平板上的菌落数，CFU；Q为采样流量，m3/min；t为采样时间，min。

五、实验结果讨论

（1）空气中的细菌数量随气体中的尘埃变化而改变。大气中的细菌在医院、畜舍、宿舍及城市街道比较多。

（2）空气中的微生物种类，主要是真菌类、细菌类的少量病毒。一般陆地空气中的微生物中，有病毒、真菌和细菌。真菌多为曲霉、交毛连霉等。细菌多为放线菌、芽孢杆菌及小球菌科。