空气细菌检测成果-环境工程微生物学实验

一、实验目的

（1）通过实验了解指定空气中细菌的数量。

（2）学习检测空气中细菌的基本方法。

二、实验原理

沉降法也称平皿落菌法，是将盛有培养基的平皿放在空气中暴露一定时间，让空气中细菌自然沉降于培养基上，经培养后计数其上生长的菌落数，按公式推算出每立方米空气中细菌总数。此法简单，使用普遍，但因只有一定大小的颗粒在一定时间内才能降落到培养基上，所测的微生物数量比实际存在数量少，并且也无法测定空气量，所以仅能粗略计算空气污染程度和了解被测区域微生物的种类。

我国《室内空气中细菌总数卫生标准》（GB/T 17093—1997）规定，室内空气细菌的卫生标准：沉降法所测每皿细菌总数≤45 CFU。

三、实验仪器和材料

实验所需仪器有高压蒸汽灭菌器、生化恒温培养箱、玻璃器皿、500 mL三角瓶、1 000 mL烧杯、平皿等。

实验所需材料有牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、氢氧化钠、盐酸。

四、实验步骤

1.培养基的配制

（1）营养琼脂培养基：蛋白胨20 g，牛肉膏5 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，pH 7.4～7.6。称取上述各成分混合加热，充分溶解，用质量分数为15%的氢氧化钠溶液和质量分数为10%的盐酸调节pH为7.4～7.6，置于高压蒸汽灭菌器121℃灭菌20 min，倒入平皿约占1/2高度，冷却，备用。

图2-1　五点梅花式采样点

（2）采样点的选择：选择有代表性的采样点。室内采样，一般为五点梅花式采样（图2-1）。在实验室的四角及中央共选取5个点。室外采样可根据地势高低、房舍远近而设立采样点。设平行样3～5个。

2.操作(www.xing528.com)

（1）将上述已灭菌培养基平皿放在选定的采样点上，打开皿盖，暴露于空气中约5 min，盖上皿盖。

（2）将样品带回实验室，倒置于生化培养箱，恒温37℃，培养24～48 h，观察菌落数。

（3）继续培养5 d，观察是否有放线菌及霉菌生长。

（4）数据记录（表2-1）。

表2-1　沉降法检测空气中微生物的种类和数量统计表

（5）计算：以奥梅梁斯基公式计算法计数。在面积为100 cm2平板琼脂培养基表面上，5 min降落的细菌经37℃培养24 h后所生长的菌落数和10 L空气中所含的细菌数相当。根据奥梅梁斯基公式计算，即

式中，x为每1 m3空气中的细菌个数；N为5 min降落在平板上的细菌，经37℃培养24 h后所生长的菌落数；r为平皿底半径。

五、结果讨论

在使用奥梅梁斯基公式计算沉降法检测的细菌总数时，要根据空气污染的尘埃粒子大小、数量、空气流通情况、人为活动范围等因素，在最后计算的结果中增加菌量10%～15%。

六、思考题

（1）请分析沉降法检测空气中浮游细菌的优缺点。

（2）计算空气中微生物含量，确定空气的卫生状况。