环境微生物实验：葡萄糖氧化发酵

一、实验目的

（1）了解微生物的葡萄糖氧化发酵实验基本原理。

（2）掌握葡萄糖氧化发酵实验技术。

（3）掌握鉴别微生物利用糖类产酸的类型——氧化性产酸和发酵性产酸。

（4）学会判断产气微生物的方法。

二、实验原理

有些微生物能以氧化或发酵方式分解葡萄糖，糖代谢产酸，有的种类还产气。前者产酸慢、量少，后者产酸快、量多。通过含低有机氮的培养基，据指示剂颜色变化，可鉴别细菌利用糖类产酸的类型——氧化性产酸和发酵性产酸；据软琼脂柱中有无气体，可判断是否产气。

三、实验器材

（1）菌种：大肠杆菌和荧光假单胞菌的幼龄（18～24 h）斜面培养物。

（2）试剂：灭菌凡士林油（凡士林与液体石蜡以1∶1混合配制）。

（3）培养基：休和利夫森氏（Hugh&Leifson）软琼脂培养基（详见附录三　常用培养基）10支。

（4）仪器及用具：恒温培养箱、接种针、酒精灯。

四、操作步骤

1.培养基编号

给10支休和利夫森氏培养基分别编号标记。(www.xing528.com)

2.接种

用无菌接种针分别取大肠杆菌和荧光假单胞菌的幼龄菌苔少许，穿刺接种在休和利夫森氏软琼脂培养基中，注意接种针勿碰到试管底部。两菌种分别接4支，另外2支不接种（空白对照）。

3.封管

取已接种管各2支、对照管1支，用灭菌凡士林油封盖（即在培养基上加油1 cm左右），为闭管；其余管不封油，为开管。

4.培养

将10支试管培养基置于恒温培养箱，30℃～37℃培养1 d、3 d、7 d后观察。

5.记录结果

（1）仅开管的培养基变黄的菌种，为氧化产酸菌。

（2）开管和闭管的培养基都变黄的菌种，为发酵产酸菌。

（3）琼脂培养基内产生气泡的菌种，为产气菌。

6.改进法

封管和洗刷较烦琐，也可不封油，只接种2支培养基，培养12～18 h，观察结果。若培养基变色从表面开始向下扩散，属氧化产酸；培养基变色自下往上扩散，为发酵产酸。若24 h已全部变黄，即使从上部开始，也可能是发酵，应再用封管实验检验。

五、思考题

两种受检菌培养基的变化有何不同，为什么？