微生物油脂水解实验环境工程微生物学实验

一、实验目的

（1）了解微生物的油脂水解实验基本原理。

（2）掌握油脂水解实验技术。

（3）学会判断分解脂肪的微生物的方法。

二、实验原理

有些微生物具备合成脂肪酶的能力，分泌的胞外脂肪酶能将细胞外大分子的脂肪水解为甘油及脂肪酸，脂肪酸能使培养基的pH下降。利用这一特点，在油脂培养基（附录3）中加入中性红作为指示剂[中性红的指示pH范围为6.8（红色）～8.0（黄色）]，若菌落周围培养基中出现红色斑点，则说明受检微生物能分解脂肪。

三、实验器材

（1）菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、铜绿假单胞菌。

（2）培养基：在普通牛肉膏蛋白胨培养基中加花生油10 mL和1.6%中性红水溶液1 mL。

（3）其他器材：接种环、酒精灯、平皿。

四、实验步骤

1.制作油脂培养基平板(www.xing528.com)

先将盛有无菌油脂培养基的锥形瓶放于沸水中熔化，取出振荡至油脂分布均匀，再倒入无菌平皿中，静置凝固成平板。

2.接种

用无菌接种环取少量的受检菌点接在培养基表面，每皿可同时接种2～4种不同菌种，其中以金黄色葡萄球菌为对照菌；以每皿4～8个菌落为宜（图1-50）。点接处分别编号，记录下菌种名称。

3.培养

将已接种的平板置于恒温培养箱，37℃培养24 h。

4.观察

取出培养皿，仔细观察平板，记录每个菌落周围颜色变化。若底层长菌落处出现红色斑点，则表明脂肪已被水解，呈阳性反应，据此可判断该菌具有分解脂肪的能力。

五、思考题

（1）为什么实验要无菌操作？

（2）实验中不同受检菌的实验结果有何不同？