微生物氧化酶实验结果

一、实验目的

（1）了解微生物的氧化酶实验基本原理。

（2）掌握氧化酶测试实验技术。

二、实验原理

细胞色素氧化酶与细胞色素a、b、c构成氧化酶系，参与微生物的氧化反应。细胞色素氧化酶在有细胞色素存在时，加入盐酸对氨基二甲基对苯胺，可呈玫瑰红到暗紫红色。

由氧化酶测定反应可判断受检菌是否具有细胞色素氧化酶。另外，氧化酶测定常用来区分假单胞菌属（及相近种属的细菌）与肠杆菌科的细菌，假单胞菌属大多是细胞色素氧化酶阳性。

三、实验仪器

（1）菌种：假单胞菌和大肠杆菌试管斜面。

（2）试剂及培养基：1%盐酸对氨基二甲基苯胺水溶液，营养琼脂平板培养基。

（3）实验仪器：冰箱、高压蒸汽灭菌器、电子天平、电炉、酒精灯、接种针、滤纸、细玻棒、吸水纸、平皿等。(www.xing528.com)

四、实验步骤

（1）1%盐酸对氨基二甲基苯胺水溶液应事先盛于棕色瓶置于冰箱贮存。该溶液极易氧化，故贮存时间不能超过2周。若溶液变为红褐色，则不能再用。

（2）用无菌操作分别从受检菌的斜面取培养菌少许，接种在营养琼脂平板上，35℃培养18～24 h。

（3）取一张滤纸置于洁净的平皿中，滴上1%盐酸对氨基二甲基苯胺水溶液，以使滤纸湿润为宜；若加入量太多，滤纸过湿，会影响菌苔与空气接触，延长显色时间，造成假阴性。

（4）用细玻棒刮取平板上受检菌的菌落，涂抹在湿润的滤纸上。

（5）仔细观察，若在10 s内菌苔或其边缘呈红色，则该菌为阳性；若10～30 s出现红色，则该菌为迟缓阳性；不呈红色或30 s后出现红色，则该菌为阴性。

五、注意事项

（1）不能用镍铬丝或铁丝取菌苔，否则会产生假阳性。

（2）滤纸滴加试剂过多或过少都将影响试验结果，注意滴加适量。