一、实验目的
（1）了解细菌的生长规律及形成生长曲线的基本原理。
（2）掌握用比浊法测定细菌生长曲线的方法。
（3）巩固活菌计数方法。
二、基本原理
将少量的细菌接种在一个封闭的、盛有一定量液体培养基的容器内，保持一定的温度、pH和溶解氧，细菌个体数量随时间推移而有所增减，呈现一定规律性：细菌数量先由少变多，达到高峰后再由多变少，最后死亡。以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标作图，得到细菌的生长曲线。生长曲线反映了微生物生长繁殖至衰老死亡整个生命周期的动态变化过程，可粗略地分为迟滞期、对数期、静止期和衰亡期4个阶段。
比浊法是用浊度计或比色计测定培养液中微生物的数量的方法。某一波长的光线，通过混浊的液体后，其光强度将被减弱。由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，可利用分光光度法测定菌悬液的光密度（OD）值来推知菌液的浓度。
三、实验仪器和材料
1.菌种
实验所用菌种为培养18～24 h的大肠杆菌菌悬液。
2.培养基
实验所用培养基为无菌营养肉汤管（每管10 mL）。
3.仪器及其他用具
实验所用仪器和其他用具有恒温振荡器、电冰箱、721分光光度计、灭菌吸管（0.5 mL或1.0 mL）。
四、操作步骤
1.编号
取14支无菌营养肉汤管，分别编号0、1、2……13。(www.xing528.com)
2.接种
用无菌吸管吸取大肠杆菌悬液，接种到1～13号营养肉汤管中，每管0.5 mL。注意无菌操作。0号管不接种。
3.培养
1号管接种后即放冰箱内，其余各管斜放在恒温振荡器中，在37℃、140 r/min的条件下培养。每隔30 min，顺序取出2号管、3号管……13号管，放入冰箱。
4.测光密度值
以0号管样品作为空白对照，校正分光光度计的零点（波长400～600 nm）。从浓度最小的菌悬液开始，依次测定不同培养时间菌悬液的光密度。若菌悬液太浓，应适当稀释。
5.绘制生长曲线
以菌悬液光密度值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘出大肠杆菌在本实验条件下的生长曲线，并标出不同生长时期的位置和名称。
五、实验数据
（1）记录各管测定的数据并列表（表1-17）。
表1-17 测定数据记录表
（2）绘制生长曲线。
六、思考题
（1）在实验过程中，哪些操作步骤容易造成较大的误差？
（2）用本实验测定微生物生长曲线，有何优点？
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