一、实验目的
（1）观察前面纯种培养、分离出来的细菌的个体形态及相应的菌落形态特征。
（2）通过革兰氏染色进一步巩固染色技术。
（3）通过观察和比较细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的个体形态及其菌落特征，学会初步鉴别几种微生物的能力。
（4）学会绘制菌落形态图。
二、实验器材
1.主要仪器、器皿
实验所需主要仪器、器皿有恒温培养箱、显微镜、煤气灯（或酒精灯）、载玻片和接种环等。
2.实验材料
（1）革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革兰氏碘液、体积分数为95%的乙醇、番红染液等。
（2）四大类菌落（培养皿）：前面几个实验培养分离出的各种细菌。另外实验室配给放线菌、酵母菌及霉菌等各类菌落，四大类菌落的主要特征见表1-16。
表1-16 四大类微生物的菌落特征表
三、实验内容与方法
（一）菌落形态和个体形态观察
1.菌落形态观察
由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形成的菌落特征，可初步辨别是哪种类型微生物。观察时注意仔细留意菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛高度、颜色、透明度、气味、黏滞性、质地软硬、表面粗糙与光滑情况等综合情况，据此判断微生物的类型。
微生物个体形态和菌落形态的观察是菌种鉴定的非常重要的第一步。(www.xing528.com)
（1）观察步骤如下：①将培养出的细菌菌落逐个辨认、编号，按号码顺序将各细菌的菌落特征记录下来；②用铅笔绘制菌落形态图。
（2）比较四大类微生物菌落特征：仔细观察、比较前面实验培养分离出的细菌和实验准备的放线菌、酵母菌和霉菌的菌落特征并详细描述及做好记录。
2.个体形态特征观察
（1）制作涂片：通过无菌操作用接种环按号码顺序选择几种细菌的单菌落做涂片。
（2）进行革兰氏染色。
（3）观察微生物个体形态：镜检、观察，确定其革兰氏染色反应。由于只做了一次分离实验，得到的单菌落可能不太纯，镜检时会出现多种菌体形态。
（4）用铅笔绘制形态图。
（二）菌苔特征的观察
1.接种
在无菌状态下，用接种环分别挑取平板上长出的各种单菌落，分别在斜面上由下而上呈Z形或直线划线，接种于各管斜面培养基，塞好棉塞。注意尽量选择独立的单菌落进行斜面接种，保证培养后得到纯斜面菌种。
2.培养
将已接种的斜面培养基放于试管架上置于37℃的恒温箱中，培养24～48 h。
3.观察
仔细观察斜面上菌苔特征，并做好详细记录。这些菌苔特征不仅在菌种鉴定上具有参考价值，也可用于检查菌株的纯度。
四、思考题
（1）请比较、描述分离培养出的菌落形态特征和个体形态特征。
（2）要使斜面的线条致密、清晰，接种时应注意哪些问题？
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