环境工程微生物学实验：实验紫外线灭菌成果

一、实验目的

（1）通过实验过程，了解紫外线灭菌法。

（2）掌握紫外线使用技术。

二、实验原理

紫外线灭菌是使用紫外线灯管进行的。波长在220～300 nm的紫外线被称为紫外线的“杀生命区”，其中以260 nm的紫外线杀菌力最强。该波长紫外线作用于细胞DNA，使DNA链上相邻的嘧啶碱形成嘧啶二聚体，从而抑制DNA复制。另外，空气在紫外线照射下可以产生臭氧，臭氧也有一定的杀菌作用。

图1-31　紫外线灯、净化工作台

三、实验仪器

实验仪器包括紫外线灯、净化工作台（图1-31）、玻璃器皿、平皿。

四、实验试剂

实验试剂包括牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、NaOH、HCl。

五、实验操作(www.xing528.com)

1.培养基的制备

营养琼脂培养基配制如下：牛肉膏1 g、蛋白胨5 g、琼脂18 g、氯化钠1.8 g，加蒸馏水定容至1 000 mL。

将上述营养成分加热溶解，调整pH为7～8，分装于三角瓶中，置高压灭菌器内120℃灭菌30 min，待用。

2.操作步骤

（1）将悬挂或立地式紫外线灯打开2 h，将净化工作台打开2 h灭菌。

（2）将培养基倒入平皿内（在净化工作台内操作），待冷却凝固。

（3）将凝固的平皿按距紫外线灯0.5 m、0.8 m、1 m、1.2 m、1.5 m、1.8 m、2 m的距离摆放，同时打开皿盖。裸露10 min后，盖上盖同时收起，置于生化恒温培养箱内28℃培养48 h。

（4）记录：与紫外线灯距离、细菌菌落数、紫外线灯功率。

（5）根据测定结果，找出紫外线灯灭菌最好效果的最佳因素。

六、思考题

紫外线灯灭菌时应注意什么？