高压蒸汽灭菌实验成果

一、实验目的

（1）学习灭菌的准备工作。

（2）学习掌握高压蒸汽灭菌技术

二、实验原理

加压蒸汽灭菌法是利用高压灭菌器，使水的沸点随压力加大而升高（表1-12），以高温蒸汽来杀灭微生物的湿热灭菌方法。

通过变性作用灭菌：蛋白质包括（酶）在高温和高压下发生不可逆的变性而杀灭微生物。

通过凝固作用灭菌：蛋白质的凝固温度随水分增多而降低（表1-13），因此，水分少或无水分的物品需提高温度才能使菌体蛋白质凝固。

通过穿透作用灭菌：湿热穿透能力强（表1-14），在水蒸气与被灭菌的物品接触后，可放出大量汽化潜热，迅速提高被灭菌物品的温度，提高灭菌效率。在同一温度下，湿热的杀菌效率一般高于干热。

表1-12　加压蒸汽灭菌器中压力与蒸汽温度之间的关系

表1-13　菌体蛋白质的凝固温度与其含水量的关系

表1-14　湿热与干热的穿透力及其灭菌效果比较

三、实验器材

（1）培养皿、试管、吸管、锥形瓶，烧杯。

（2）纱布、棉花、报纸、牛皮纸。(www.xing528.com)

（3）高压蒸汽灭菌器、电烘箱、冰箱、电炉等。

四、实验内容

（1）加水。热源为煤气灯或电炉者，需先加水到器内底层隔板以下1/3处；有加水口的从加水口加入，至水位到水线时停止。若热源为蒸汽不必加水。

（2）把需要灭菌的器物放入灭菌器内（注意器物间留有空隙），关严灭菌器盖，不要漏气。

（3）打开出气口。

（4）点火。如热源为蒸汽，则应慢慢打开蒸汽进口，不要让蒸汽过猛冲入灭菌器内。

（5）器内的水沸腾后，蒸汽逐渐驱除内部原有冷空气。如灭菌器装有温度计，当温度计显示100℃时，表明器内已经充满了蒸汽，可以关闭出气口；如没有温度计，则当出气口排出的蒸汽特别猛烈时认为冷空气被全部驱除，可以关闭出气口。应当特别注意，如果冷空气没有排尽，器内虽然到达一定的气压，但不会到达所需的温度。

（6）关闭出气口后，器内的蒸汽将不断增多，压力和温度不断升高。当蒸汽压达到所需的压力时，即为灭菌时间开始，这时要调整火力的大小，以维持所需的压力。灭菌时间的长短由灭菌物体所决定。玻璃器皿，无菌水营养琼脂培养基可用1 kg/cm2（121℃）的压力灭菌20 min，含糖的培养基用0.7 kg/cm2（115℃）的压力20 min。

（7）灭菌的时间达到，停止加热。

（8）等压力计指数到了0时，打开出气口。如果过早打开，压力骤减，温度并不会很快下降，会导致培养基翻腾，污染棉塞。

（9）揭开器盖，取出灭菌的物品，将剩余的水放掉。

（10）待灭菌物冷却后，取出置于冰箱内放置待用。

五、思考题

（1）为什么灭菌前需要排出冷空气？

（2）含糖培养基为什么需要在115℃灭菌？