一、实验目的
（1）了解无菌操作。
（2）掌握培养基母液的配制方法。
二、实验原理
配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释，完成培养基配制。
三、实验器材和药品
（1）器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
（2）药品：硝酸铵、硝酸钾、二水合氯化钙、七水合硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硼酸、四水合硫酸锰、七水合硫酸锌、钼酸钠二水合物、五水合硫酸铜、六水合氯化钴、七水合硫酸亚铁、二水合乙二胺四乙酸二钠、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸。
四、实验步骤
1.大量元素母液的配制
各成分按照表1-7每升培养基中含量的10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合，最后用蒸馏水定容到1 000 mL的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。将母液倒入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1 L培养基取此母液100 mL。
表1-7 MS培养基大量元素母液制备
注意：
（1）配制大量元素母液时，某些无机成分如钙离子、硫酸根离子、镁离子和磷酸二氢根离子等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯。各种化学药品必须先以少量重蒸馏水充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将钙离子、硫酸根离子、镁离子和磷酸二氢根离子等错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
（2）二水合氯化钙要在最后单独加入。在溶解二水合氯化钙时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的二氧化碳，以防沉淀。另外，二水合氯化钙放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
2.微量元素母液的配制
MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用量较少，特别是五水合硫酸铜、六水合氯化钴，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表1-8、表1-9配方，用电子天平称量，其他步骤同大量元素。配制培养基时，每配制1 L培养基，取微量Ⅰ10 mL，微量Ⅱ0.1 mL。
表1-8 MS培养基微量Ⅰ的配制
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表1-9 MS培养基微量Ⅱ的配制
注意：使用电子分析天平时注意不要把药品撒到秤盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。
3.铁盐母液的配制
铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1 L。配制培养基时，配制1 L取此液10 mL。见表1-9。
表1-10 MS铁盐母液的配制
注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠螯合不彻底。此时若将其冷藏，硫酸亚铁会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（加热20～30 min），调pH至5.5，室温放置冷却后再冷藏。
4.有机母液的配制
MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1 L。注意称量时用电子分析天平。配制培养基时，每配1 L培养基取此液5 mL（表1-11）。
注意：由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成危害，不宜再用。避免此现象发生的方法是，配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。
表1-11 MS培养基有机物质母液的制备
5.激素母液配制
植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的终浓度以0.5 mg/mL为好。需要注意以下几点：
（1）配制生长素类，如IAA、NAA、2.4-D、6BA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1 mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
（2）细胞分裂素，如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3～4滴1 mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
注意：所有的母液都应保存在0℃～4℃冰箱中。若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。
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