N-APPJ生物医学应用的生物安全性研究：毒性比较及长期效应

本章主要围绕N-APPJ生物医学应用的生物安全性这一核心主题进行了研究。主要内容可以分为以下几部分：以HaCaT 细胞为模型，研究并确定了N-APPJ与液体相互作用时产生的主要长寿命活性粒子（和）及其组合对正常细胞的毒性和安全浓度范围。比较研究了PAM 对HepG2细胞和L02细胞的毒性。以A875细胞和HaCaT 细胞为模型，系统比较了化学方法配制的RONS溶液、PAM 和N-APPJ直接处理三种方式对正常细胞和癌细胞的毒性。以人正常肝细胞L02细胞为模型，对N-APPJ直接处理可能具有的潜在遗传毒性和致突变风险进行了系统研究，并且首次研究了N-APPJ直接处理是否对被处理细胞产生“远后效应”。本章得到的主要研究成果可归纳如下。

（1）即使的浓度比N-APPJ或PAM 正常处理时的浓度高出一个数量级，它们单独或共同作用对正常细胞都基本没有毒性。H2O2能对正常细胞产生氧化损伤，而且H2O2与混合后对正常细胞的毒性会显著增强。

（2）PAM 能够通过诱导细胞凋亡的方式选择性杀死HepG2细胞，而且存在一个最佳PAM 处理剂量，可以在最大程度杀死HepG2细胞的同时对正常细胞产生较少的损伤。(www.xing528.com)

（3）PAM 和化学方法配制的RONS溶液不能选择性杀死A875细胞，而采用N-APPJ直接处理时，当处理时间合适时，可以实现有效杀死A875细胞的同时对HaCaT 细胞的损伤较低。这说明PAM 并不是在所有的情况下都具有和N-APPJ直接处理相似的生物医学效应。N-APPJ直接处理时产生的短寿命活性粒子和不同细胞系固有的内在特性是N-APPJ直接处理选择性杀死A875细胞的两个重要原因。因此，在癌症治疗应用中，需要充分评估不同癌症类型对N-APPJ直接处理和PAM 作用效果的影响。

（4）长时间N-APPJ直接处理不仅会造成细胞直接死亡，存活下来的细胞染色体也会受到损伤，细胞微核率会明显增加。但N-APPJ直接处理造成的染色体损伤可以通过充分的细胞分裂和增殖在存活细胞后代中得到修复，后代细胞中没有出现延迟的细胞增殖死亡、微核率增加等延迟的细胞基因组不稳定的表现。当后代细胞再次用N-APPJ处理时，后代细胞死亡百分比、微核率和HPRT 基因突变频率与第一次相同处理时间下的结果相比并没有明显区别，这说明N-APPJ直接处理对细胞的损伤不具有“远后效应”。而且，两轮N-APPJ直接处理后，L02细胞的HPRT 基因突变频率与未处理时的自然突变频率相比也没有显著变化，说明一两次的N-APPJ处理对细胞基本没有致突变作用。