大气压非平衡等离子体射流处理引起的L02细胞损伤研究

为了确定N-APPJ处理对L02细胞造成的遗传损伤是否会在后代细胞中累积，如前所述，选取第一次30min处理组的存活细胞（约45%）继续传代培养，传代培养7次之后（约20d后）再一次对后代细胞进行第二轮射流处理，并检测相同的指标，以比较在相同的处理时间下得到的结果是否存在明显差异。第二轮处理没有选择0.5min和1min这两个时间点，因为它们在第一轮处理中的结果与对照组相比并没有明显差异。

后代细胞在用N-APPJ进行第二轮直接处理，再继续培养24h后得到的流式分析结果图片如图6.5.7所示，对应的处理后24h和48h死亡细胞百分比如图6.5.8所示。

由图6.5.7和图6.5.8可以看到，处理时间为0min对应的细胞凋亡情况与第一次处理时的对照组（图6.5.3中的0min组）相比已经没有明显区别；而且，传代培养7次后的细胞再一次被N-APPJ直接处理后，无论是凋亡细胞和坏死细胞的具体比例，还是死亡细胞总的百分比，与第一轮中相同处理时间下的实验结果相比也没有明显的区别，并没有出现第一次处理造成的损伤在后代细胞累积导致相同处理时间下第二次处理对细胞产生更加严重损伤的情况。这些结果说明，至少从细胞凋亡的结果来看，第一次处理后存活的细胞在经过充分的细胞分裂和增殖后已经恢复到了正常细胞水平。

图6.5.7　后代细胞经过不同时间的N-APPJ处理后对应的流式分析结果图片[62]

图6.5.8　后代细胞经过不同时间的N-APPJ处理后24h和48h死亡细胞百分比[62](www.xing528.com)

n.s.表示无显著性差异，** P＜0.01（与24h后对应对照组比较），## P＜0.01（与48h后对应对照组比较）

后代细胞在N-APPJ再次处理不同时间后对应的微核率如图6.5.9 所示。可以看到后代细胞在未处理时的微核率为10.3‰，已经恢复到了第一次N-APPJ处理前的水平（11.3‰）。当细胞再次用N-APPJ分别处理5 min、10min、20min和30min后，对应的细胞微核率分别为51.7‰、74.3‰、126.3‰和147.7‰，与第一轮中相同处理时间下的微核率相比并没有明显的区别。这些结果表明，就微核率这一指标而言，当后代细胞再次用N-APPJ处理时，第一次N-APPJ处理30min对初始细胞产生的染色体损伤并没有对第二次处理后细胞微核率的结果产生统计学意义上的影响。

图6.5.9　后代细胞经过不同时间的N-APPJ处理后的微核率结果[62]

**P＜0.01，与对照组相比

后代细胞在等离子体射流再次处理不同时间后HPRT 基因的突变频率如图6.5.10所示。可以看到，在后代细胞再次分别用N-APPJ处理5 min、10min、20min和30min后，HPRT 基因的突变频率与对照组细胞对应的自然突变频率相比仍然没有统计学上的显著性差异。