【摘要】：最后将100μL不同浓度的RONS溶液加入细胞培养孔中，HaCaT 细胞在RONS溶液中继续培养并进行后续一系列的检测。HaCaT 细胞经过处理后胞内ROS水平的变化情况，使用活性氧检测试剂盒进行检测。
1.细胞培养
实验所用的HaCaT 细胞购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，HaCaT 细胞用含10%胎牛血清（Gibco公司）、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素溶液的MEM 培养基在5% CO2、37 ℃恒温的细胞培养箱中进行培养和传代。配制RONS溶液所用的溶液包括硝酸钠、亚硝酸钠和过氧化氢溶液。为了描述方便，后续章节将用完全培养基指代上述在基础培养基中加入了血清和抗生素的培养基。
2.细胞处理
在对HaCaT 细胞用RONS溶液正式处理前，HaCaT 细胞按照12000个/孔的密度接种到96孔板中，每个培养孔中加入100μL 完全培养基，让细胞贴壁生长24h。之后将完全培养基作为溶剂配制不同浓度的
及它们的组合。然后将孔板中的旧培养基移除并用无菌PBS吹洗一遍。最后将100μL不同浓度的RONS溶液加入细胞培养孔中，HaCaT 细胞在RONS溶液中继续培养并进行后续一系列的检测。(www.xing528.com)
3.检测方法
HaCaT 细胞在用不同浓度的
及它们的特定组合培养24h后的存活率，使用CCK-8细胞增殖-毒性试剂盒进行检测。HaCaT 细胞经过处理后胞内ROS水平的变化情况，使用活性氧检测试剂盒进行检测。具体检测步骤可以参考所用相应产品说明。
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