腺病毒为双链DNA 无包膜病毒。核衣壳呈二十面体立体对称,直径为70~90nm,对细胞有毒性。腺病毒对理化因素造成的影响的抵抗力较强,在室温条件下可存活10天以上,腺病毒主要通过呼吸道、胃肠道和密切接触传播,是口腔中最为常见的病毒之一[77]。在体外培养腺病毒时,常以人胚肾细胞(HEK293)细胞作为载体进行相关研究。
本实验采用高压直流驱动的N-APPJ装置,针头通过130 MΩ 电阻连接到电源,该电阻用于将放电电流限制在人体可触摸的安全范围内,如图2.5.1所示。与真菌处理方案相同,实验同样分为加盖与不加盖两组,其中射流的工作电压为15kV,工作气体为He+1%O2(0.5L/min)。实验开始,首先在无菌钛片(直径2cm)上滴上20μL 病毒原液,分别用等离子体处理0 min、2min、4min、8min、16min,每次重复3个样本。处理结束,将钛片放入无菌的培养皿中,每个培养皿加入200μL 细胞悬浮液,用移液枪反复冲洗钛片后放置20min,使钛片上的病毒充分溶于培养液中,然后将培养液全部析出转移至1mL的无菌离心管中,以准备滴度测定。
病毒滴度是病毒感染性能的表征,病毒滴度的测定方法有pfu、efu、TCID50、VI等,这里使用经典的TCID50法(即半数致死量法)来测定病毒的梯度,如图2.5.2所示。
图2.5.1 等离子体处理腺病毒的实验示意图[77]
图2.5.2 病毒滴度测试流程图[77](www.xing528.com)
图2.5.3 为等离子体处理后的病毒滴度曲线,可以看出加盖后的处理效果明显高于不加盖的处理效果。加盖情况下等离子体处理2 min就使得病毒滴度下降了1.5个数量级,处理8 min后更是下降了2个数量级,这证明了等离子体对腺病毒具有很强的灭活效果。图2.5.4为将处理后的病毒液稀释后感染HEK293细胞的荧光照片,可以看出,随着处理时间的增加,图片中的荧光强度越来越弱,说明腺病毒感染的细胞数量越来越少,即腺病毒浓度越来越低,与滴度曲线结果一致。实验结果说明等离子体对离体病毒也具有很好的灭活效果。
图2.5.3 加盖和不加盖条件下等离子体处理后腺病毒滴度随时间变化曲线[77]
图2.5.4 等离子体处理后腺病毒侵染HEK293细胞的荧光图片[77]
免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。